ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Методы приготовления препаратов микроорганизмов из "Практикум по микробиологии" Техника взятия культуры для приготовления препарата. Обожженной в пламени бактериололичеокой иглой из пробирки с культурой, держа ее в левой руке почти в горизонтальном положении вблизи горелки, берут небольшое количество микробной массы. Перед взятием-культуры правой рукой вынимают ватную пробку из пробирки, зажимая ее между мизинцем и ладонью, а края пробирки обжигают на пламени горелки. Иглу следует держать в правой руке большим, указательным и средним пальцами. [c.23] При взятии культуры пробирку необходимо удерживать в наклонном положении. Если культуру берут из жидкой среды, не следует сильно наклонять пробирку, чтобы не смочить ее края и пробку, и лучше пользоваться петлей. После взятия культуры края пробирки и пробку обжигают в пламени и закрывают пробирку. [c.23] Препараты микроскопируют, слегка затемняя поле зрения конденсор несколько опускают, поступление света регулируют вогнутым зеркалом. Вначале пользуются малым увеличением (объектив 8Х), после того как обнаруживают край капли, устанавливают объектив 40Х или иммерсионный (90Х). Более четкие результаты можно получить при микроскопии в темном поле или в фазовом контрасте. [c.24] В случае метода раздавленной капли на чистое предметное стекло наносят каплю водопроводной воды. В каплю вносят культуру и смешивают с водой. Накрывают каплю покровным стеклом так, чтобы под ним не образовывались пузырьки воздуха. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному и удаляют избыток воды фильтровальной бумагой, поднося ее к краям покровного стекла. При просмотре- приготовленного препарата под микроскопом с иммерсионной системой объектива на покровное стекло наносят каплю кедрового масла. [c.24] Для длительных наблюдений за клетками микроорганизмов применяют метод висячей капли. На стерильное покровное стекло наносят иглой негустую суспензию микроорганизмов, выращенных в жидкой питательной среде или подготовленных для данной цели в физиологическом растворе (0,5% ЫаС1). Покровное стекло перевертывают и помещают на стерильное предметное стекло с лункой посередине так, чтобы капля свободно свисала над лункой. Для герметичности края лунки смазывают вазелином. [c.24] Фиксированные препараты микроорганизмов. В микробиологии часто применяют эти препараты. Их рассматривают под микроскопом в окрашенном виде. Под фиксацией подразумевается такая обработка живого объекта, которая дает возможность быстро прервать течение жизненных процессов в объекте, сохранив его тонкую структуру. В результате фиксации клетки прочно прикрепляются к стеклу и лучше прокрашиваются. Фиксация необходима и в случае работы с патогенными микроорганизмами ( в целях безопасности). [c.24] Приготовление мазка. На чистое обезжиренное предметное стекло наносят каплю водопроводной воды. [c.24] Прокаленной бактериологической иглой из пробирки с культурой микроорганизмов берут небольшое количество микробной массы и вносят в каплю. Каплю тщательно размазывают петлей по стеклу на площади приблизительно 4 см . Очень густую суспензию разводят водой. Для этого стерильной петлей берут немного суспензии и переносят в каплю воды на другое предметное стекло. Суспензию размазывают тонким слоем, затем мазок сушат, желательно на воздухе при комнатной температуре или при слабом нагревании, держа препарат высоко над пламенем горелки. Сильный нагрев препарата при подсушке мазка не рекомендуется, так как белки клеток свертываются, искажая структуру И форму клеток. Высушенный препарат фиксируют. [c.25] Фиксацию мазка проводят или над пламенем горелки (при исследовании формы клеток), или с помощью химических соединений (для исследования внутренней структуры клеток). В первом случае препарат 3—4 раза медленно проводят тыльной стороной над пламенем горелки. При фиксации с помощью химических веществ используют хромовые соединения, формалин, осмиевую кислоту, ацетон. [c.25] Один из наиболее распространенных приемов фиксации-обработка препарата 96%-ным спиртом или смесью равных объемов этилового спирта и эфира (жидкость Никифорова). При этом препараты погружают на некоторое время в фиксирующую жидкость. [c.25] Окрашивание препарата. При окрашивании мазка препарат помещают на препаратодержатель. На мазок наносят несколько капель красителя. В зависимости от красителя и целей исследования продолжительность окрашивания различна (1—5 мин, в отдельных случаях 30 мин и дольше). После окончания окрашивания препарат промывают водой, фильтровальной бумагой удаляют воду, подсушивают на воздухе и микроскопи-руют. [c.25] Существуют простые и дифференцированные методы окраски. При простой окраске используют один какой-либо краситель, например метиленовый синий, фуксин, генциан фиолетовый в щелочных или карболовых растворах. Прокрашивается вся клетка. При дифференцированной окраске разными красителями окрашиваются отдельные структуры клетки. Таковы методы окраски по Граму, окраска спор. [c.25] В микробиологической практике кислые н основные красители используются в виде солей, так как они способны вступать в реакцию с кислотами и основаниями. Основные красители чаще применяются в внде солей соляной, реже уксусной и серной кислот кислые красители — в виде натриевых или калийных солей. Ниже приведены наиболее часто употребляемые красители. [c.26] Основные красители окрашивают объект интенсивнее в более щелочной среде, кислые — в более кислой. Чтобы различить растворы кислых или основных красителей, погружают в раствор полоску фильтровальной бумаги. Она песет отрицательный электрический заряд. В случае основного окрашивающего раствора его катион, обусловливающий окрашивающую способность, фиксируется отрицательным зарядом бумаги, и по ней вследствие капиллярности будет распространяться только вода (в виде бесцветной полосы). Если раствор содержит кислый краситель, его анион будет подниматься по бумаге и окрасит ее. [c.26] Окрашивание живых клеток микроорганизмов (витальная окраска) — трудоемкий процесс и поэтому используется редко. Предполагают, что при фиксировании увеиичивается число свободных амино- и карбоксильных груйп, в результате повышается сродство клетки к красителю. [c.26] Красители можио разделить иа позитивные и негативные. Из красителей, применяемых в микробиологии, большинство относится к позитивным. Они окрашивают клетки при комнатной температуре в течение 30—60 с. Негативные красители окрашивают пространство, окружающее клетки микроорганизмов. В результате клетки выглядят силуэтами на фойе красителя. [c.27] Некоторые микроорганизмы (напрнмер, спирохеты) и отдельные структуры (внеклеточная слизь), плохо выявляемые с помощью по-витивных красителей, легко выявляются прн окрашивании негативными красителями. Споры без соответствующей обработки не окрашиваются, поэтому прн окрашивании клеток бацилл позитивными красителями они окрашиваются как бы негативным способом имеют внд преломляющих свет включений в вегетативных клетках. [c.27] Вернуться к основной статье