ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Общие вопросы связывания на аффинном сорбенте из "Аффинная хроматография" Отсюда следует, что, поскольку между ингибитором и ферментом образуется связь, в целом процесс очистки следует рассматривать скорее как осаждение, а не как хроматографию. Это может быть продемонстрировано изотермой адсорбции для аффинной хроматографии, приведенной на рис. 5.1 суммарная изотерма адсорбции (5) может быть определена как сумма изотерм специфической (1) и неспецифической (2) адсорбции. Специфическая изотерма адсорбции характеризует идеальную специфическую сорбцию с постоянной и относительно высокой адсорбционной энергией АО для всех адсорбируемых частиц. Сорбция прекращается, когда все доступные аффинантные центры заняты. [c.63] Изотерма неспецифической адсорбции характеризует сорбцию белков на неспецифических участках матрицы и на молекулах уже сорбированного белка. [c.63] Величина АСь складывается из АОг и ДОнеспец, где ЛС еспец — энергия реакции неспецифического комплексообразования и вклад пространственных ограничений. Если для К принять среднее значение 10 моль/л, то АС1 7 ккал/моль. [c.63] Однако иногда в неочищенном белке содержатся два или более фермента, обнаруживающих сродство к связанному аффинанту. Если константа равновесия реакции для второго фермента /(1(11) 10 моль/л, то только незначительные количества второго фермента будут задерживаться на носителе вместе с выделяемым ферментом. Если 1(11) 10 моль/л, то собируется смесь обоих ферментов даже в том случае, если выделяемого фермента много меньше / 1(11). Это следует из специфической формы изотермы адсорбции для аффинной хроматографии, поскольку теплота адсорбции предельно высока в условиях хроматографии. [c.63] Если /(1(11) отличается от К более чем в 50—100 раз, разделения можно достигнуть, например, при раздельном элюировании или при одноразовом процессе на нерастворимом аффинанте, количество которого точно соответствует содержанию наиболее сильно связываемого фермента, или при хроматографии, в которой равновесие между [Е(П)-1] и [Е(1)-1] достигается очень медленно. [c.64] Вернуться к основной статье