ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Нуклеазы и родственные им ферменты из "Биохимия нуклеиновых кислот" Эндонуклеазы подразделяются па две основные группы — рибонуклеазы, разрушающие РНК, и дезоксирибонуклеазы, вызывающие распад ДНК. [c.84] Из различных источников были получены разнообразные формы рибонуклеаз (РНК-азы). Лучше всего изучена панкреатическая РНК-аза (РНК-аза, выделенная из поджелудочно железы). [c.84] Обычно рибонуклеазу выделяют из свежей бычьей поджелудочной железы. Для этого ткань поджелудочной железы экстрагируют 0,25 п. серной кислотой, охлажденной на льду. Затем добавляют сернокислый аммоний до 0,6 насыщения, переводя в осадок трипсиноген, химотрипсиноген и дезоксирибонуклеазу. Рибонуклеазу осаждают из фильтрата, повышая концентрацию сернокислого аммония до 0,8 насыщения. Путем фракционированного осаждения сернокислым аммонием можно получить рибонуклеазу в чистом виде. Полученный фермент можно перекристаллизовать из этилового спирта. [c.85] Кристаллическая рибонуклеаза, полученная вышеописанным методом Кунитца, нередко бывает загрязнена следовыми количествами протеолитических ферментов, что может привести к ошибочным результатам. Мак-Доналд [23] разработал метод получения кристаллической рибонуклеазы, совершенно свободной от примесей протеолитических ферментов. [c.85] Рибонуклеаза характеризуется устойчивостью в широких пределах pH и значительной термостабильностью в слабокислых растворах, но легко инактивируется щелочами. На ДНК рибонуклеаза не действует. Фермент обладает ярко выраженными антигенными свойствами. Максимальная активность фермента проявляется в области pH от 7,0 до 8,2 с оптимумом при pH 7,7. Температурный оптимум рибонуклеазы 65°. [c.85] Благодаря исследованиям Мура, Сте11на и их сотрудников 19, 57] в настоящее время полностью выяснена последовательность аминокислот в молекуле рибонуклеазы. Изучены так ке активный пентр молекулы и механизм ферментативного действия [10—13]. [c.85] Рибонуклеаза разрушает также некоторые полирибонуклеотиды, образующиеся под действием полинуклеотидфосфорилазы. [c.87] Действие фермента можно продемонстрировать, исходя из следующего. Известно, что под действием раствора уранилаацетата в разбавленной трихлоруксусной кислоте полностью осаждается РНК, но не продукты ее распада [17]. Рибонуклеаза переводит около половины фосфора нуклеиновой кислоты в форму, не осаждаемую ураниловым реагентом. [c.87] Различного рода рибонуклеазы были обнаружены во многих животных тканях и в растениях [2, 3]. К числу наиболее изученных относится рибонуклеаза (К. Ф., 3.1.4.8) из такадиастазы (получаемой из культур Aspergillus oryzae) [24]. Этот фермент специфически гидролизует межнуклеотидные связи РНК между З -ГМФ и 5 -гидроксильными группами соседних нуклеотидов. Рибонуклеазы, выделенные из растений, и рибосомная рибонуклеаза из Е. соИ гидролизуют РНК до нуклеозид-З -фосфатов [25]. [c.88] Наряду с этим надосадочная фракция, получаемая при центрифугировании разрушенных клеток Е. oti, содержит рибонуклеазу, которая гидролизует РНК до пуклеозид-5 -монофосфатов [26]. [c.88] В печени крыс найдены две рибонуклеазы [54—56]. Одна из них, с оптимумом pH около 6,0, гидролизует все фосфоэфирные связи в РНК с образованием пуклеозид-2, 3 -циклических фосфатов. Для другой рибонуклеазы оптимум pH лежит в области 8,0. Она гидролизует фосфодиэфирные связи только между соседними ииримидиннуклеотидами с образованием богатых пуринами олигонуклеотидов. [c.88] Следует иметь в виду, что стеклянная посуда, диализатор и другое лабораторное оборудование могут быть довольно сильно загрязнены рибонуклеазой, содержащейся в коже человека [601. [c.88] В печени крыс обнаружен белок, являющийся сильным ингибитором панкреатической РНК-азы, но при этом не действующий пи на РНК-азу Т , пи на растительные PIiK-азы [27, 28]. Гепарин также подавляет активность панкреатической РНК-азы. [c.88] Сильным ингибитором РНК-азы является бентонит его обычно применяют для предотвращения распада РНК в ходе ее выделения [29]. [c.88] Полинуклеотидфосфорилаза может быть отнесена к депо.лиме-разам РНК. Фермент катализует обратимый процесс, в ходе которого полирибонуклеотид реагирует с неорганическим фосфатом при этом образуется рибонуклеотиддифосфат. Более детально этот вопрос рассматривается в гл. ХП. [c.88] Вернуться к основной статье