ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Поглощение света из "Коллоидная химия Издание 3" На основании формул (И1.8) и (П1.9) производится колориметрическое определение концентрации растворов окрашенных веществ. [c.55] Измерения величины ///д в монохроматическом свете при различных длинах волн А., одинаковой концентрации раствора с и толщине слоя I позволяют выразить зависимость коэс ициента е от А, в виде спектральных кривых поглощения, характерных для каждого вещества. В качестве примера на рис. 21 приведены спектры поглощения хлорофиллов а и в в интервале длин волн от 400 до 700 ммк, ясно указывающие на различия этих веществ. [c.55] Спектры поглощения измеряют на фотоэлектрическом спектрофотометре (например, на отечественном приборе СФ-4) или на спектрографе с последующим микрофотометрированием. В зависимости от примененных длин волн различают оптические, ультрафиолетовые или инфракрасные спектры поглощения (стр. 56). [c.55] Справедливость закона Ламберта — Бера, однако, ограничена определенной областью концентраций в разбавленных растворах при более высоких концентрациях значения е могут изменяться. В концентрированных растворах отклонения от закона Ламберта — Бера обусловливаются изменением ассоциации или химического состояния вещества (например, вследствие гидролиза) при изменении концентрации. В коллоидных растворах часть света теряется в результате как истинного поглощения, так и рэлеевского рассеяния, что должно учитываться при измерениях. [c.55] В растворах макромолекул и белков окраска зависит прежде всего от истинного поглощения, максимумы которого, однако, часто расположены вне видимой области спектра. Поэтому растворы, кажущиеся бесцветными в видимых лучах, могут обладать сильным поглощением в ультрафиолетовой или инфракрасной областях спектра. [c.55] Инфракрасные спектры поглощения характеризуют колебательно-вибрационные частоты связей в определенных атомных группировках — карбонильной группе С=0(5,5—6,0 мк), в ими-ногруппе М—Н (2,8—2,9 мк), в гидроксильной группе ОН(2,7— 2,85 мк). С—Н-связи в метильной группе (3,2—3,5 мк) и др. [c.56] Число возможных внутренних колебаний в сложной молекуле полимеров чрезвычайно велико, что затрудняет полную расшифровку инфракрасных спектров поэтому иногда приходится ограничиваться установлением характеристических частот, присущих определенным атомным группам (рис. 22). Интенсивность поглощения, т. е. высота спектральных максимумов, характеризует количественное содержание соответствующих групп в данном веществе. [c.56] Измерения инфракрасных спектров часто производят на пленках белков или полимеров в водных растворах эти измерения затруднены, так как вода сама обладает значительным максимумом поглощения приЗмк (волновое число 3300 см ), что мешает определению групп, поглощающих в той же области. [c.56] Большой интерес представляет применение инфракрасной спектроскопии для анализа относительного содержания цис- и транс-конфигураций в различных видах каучука и в гуттаперче, изотактических и сннднотактических конфигураций в стереоспецифических полимерах и др. Процессы окисления, термической деструкции, полимеризации, денатурации и другие изменения полимеров, связанные с появлением новых частот или изменением их интенсивности, также могут быть исследованы с помощью инфракрасных спектров поглощения. [c.57] Полимеры, образованные из оптически активных мономеров с преобладанием одного из антиподов (например, белки построены исключительно из /-аминокислот, полисахариды — из ( -углеводов и др.), изменяют направление плоскости поляризации при прохождении через них поляризованного света. Вращение плоскости поляризации измеряется специальными приборами — поляриметрами. [c.57] Чувствительным методом исследования конфигурации белков и полипептидов в нативном и денатурированном состоянии оказалось изменение зависимости величины удельного вращения от длины волны света — дисперсии оптического вращения (Доти). [c.57] Для денатурированных белков величина т] колеблется в пределах от —85 до —100° и отражает различия в аминокислотном составе белков. Это соответствует полностью неупорядоченной структуре (статистический клубок). При наличии а-спиралей характер дисперсии оптического вращения меняется и в уравнении Друде появляется второй член, равный квадрату первого, который характеризует вклад спирали в дисперсию оптической активности. Новый коэффициент в этом члене пропорционален содержанию а-спиральных структур в белке (Моффит, Кирквуд). По измерению дисперсии оптической активности можно рассчитать степень спиральности (упорядоченности) молекулы. У пепсина, например, она равна 28%, а у миоглобина — 70. [c.58] Вернуться к основной статье