ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Гаптены и комплексные антигены с химической детерминантой. О. Г. Алексеева, А. Д. Черноусов из "Аллергия к промышленным химическим соединениям" Мы уже упоминали, что промышленные химические аллергены, как правило, являются низкомолекулярными гаптенами и свойства полноценных антигенов приобретают только в результате конъюгации с белками после своего проникновения в организм через кожу или слизистые оболочки органов дыхания, желудочно-кишечного тракта и т. д. Следовательно, аллергию к химическим веществам можно рассматривать как иммунный ответ к белку организма, антигенная специфичность которого изменена в результате образования конъюгата с химическим аллергеном. [c.30] Классические опыты Landsteiner (I936) показали, nto специфичность природных антигенов может быть изменена введением очень небольших молекул. При этом введенная химическая группа играла решающую роль в антигенной специфичности искусственно приготовленного конъюгата. Следовательно, антигенная специфичность различных иммуногенов может быть обусловлена небольшими участками в молекуле антигена. Такие участки получили название детерминант. [c.31] Различают два типа детерминант — конформацион-ную и последовательную. Однако деление детерминант-ных групп на конформационные и последовательные, на наш взгляд, является условным, поскольку высшие структуры белков и их конформации в стандартных условиях обусловлены первичной структурой белка, т. е. аминокислотной последовательностью. При этом в структуру антигенной детерминанты, конформация которой распознается как чужеродная, могут входить аминокислотные остатки, формально находящиеся в различных участках молекулы, или аминокислотные остатки, следующие один за другим, т. е. последовательная детерминанта. [c.31] Поскольку конформация антигенной детерминанты стабильна, гаптен, тем более если он входит в иммунодоминанту, должен также иметь стабильное, т. е. жесткое, строение. Действительно, в молекулу многих химических аллергенов входят жесткие кольцевые структуры. Алифатические же цепи, не обладающие жесткой структурой, оказывают соответственно меньшее влияние на специфичность химических гаптенов и их комплексных антигенов и в химических аллергенах обычно составляют лишь часть молекулы. [c.33] Это соединение обладает жесткой структурой, полярностью зарядов, гидрофобными участками, но с ослабленной введением карбоксильной группы в параположение к атому хлора реактогенной способностью последнего, по нашим данным (опыты А. Д. Черноусова), не способно сенсибилизировать морских свинок даже при введении 500 мкг в ПАФ. [c.34] Конъюгаты готовили следующим образом к 30 мл охлажденных до —4°С растворов САЧ или СМС в фосфатном буфере pH 7,2 с содержанием белка 1 мг/мл дробно добавляли 0,6 мл 0,65% раствора ДФПФД в ацетоне, перемещивали и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин, затем — при -Ь37°С в течение 1 ч. Далее антигены концентрировали выпариванием под вентилятором при -Ь4°С, освобождали от непрореагировавшего белка и гаптена путем гель-фильтрации на колонке с сефадексом 0-25 и хранили при -Ь4°С. [c.42] Такой вывод позволили сделать результаты наших опытов с хромированными белками [71]. [c.43] Для приготовления конъюгатов смешивали 1 часть 0,1—0,01% стабилизированных в течение 1 нед растворов СгСЬ-бНгО и 9 частей растворов белков (САЧ, гам-ма-глобулин человека —ГГЧ и папаин) в 0,05 М растворе Na l с концентрацией белка 20 мг/мл. Инкубация при -f48° длилась И сут. Затем при 15 g осаждали денатурированную агрегированную фракцию, а элюат очищали от несвязавшегося хрома и белка путем гель-фильтрации на колонке с сефадексом G-25, уравновешенной 0,05 М раствором Na l, и обеззараживали, пропуская через миллипоровые фильтры. Конъюгаты хранили при +4°С в ампулах. Образование конъюгата подтверждалось во время спектрофотометрии в видимой и ультрафиолетовой части спектра по смещению максимума поглощения. [c.43] Морских свинок сенсибилизировали внутрибрюшинно 5 мг Сг-САЧ или 3 мг Сг-ГГЧ. Сыворотки крови их исследовали методом активной сенсибилизации с пробой на полноту десенсибилизации по Зильберу и в РПГА. В последнем случае сыворотки истощали целлюлезным сорбентом носителя, который готовили при консультации В. Т. Скворцова. [c.43] Пул сывороток морских свинок, сенсибилизированных конъюгатом Сг-САЧ, после истощения иммуносорбентом был использован в РПГА для выявления перекрестных антител к конъюгатам кобальта и никеля (конъюгаты готовили аналогично хромовым). Эти опыты выявили антитела к Со-САЧ в титре 1 48 и к Ы1-САЧ в титре 1 96. [c.44] Вернуться к основной статье