ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Энзимы, коэнзимы и протеины из "Хроматографических анализ" В течение многих лет энзимы и родственные им белковые вещества очищались добавлением сорбента к раствору, что основано на неодинаковом отношении компонентов смеси к различным сорбентам. Сорбенты не захватывают посторонних веществ, находящихся в смеси, оставляя их в растворе. Подбирая подходящий растворитель, фермент можно избирательно отделять от сорбента. Адсорбция фермента зависит от ряда условий природы сорбента, способа его приготовления, чистоты раствора, содержащего адсорбируемый фермент, объема жидкости, природы растворителя, pH среды, присутствия электролитов и пр. . [c.164] Мерой адсорбции служит число биологических единиц фермента, адсорбируемых при определенных условиях одним граммом сорбента. Определяя показатель адсорбции, можно для очистки фермента выбрать наиболее активный сорбент. Чаще всего применяют каолин и окись алюминия, а также таннин, холестерин и др. . [c.164] Для вымывания обычно употребляют раствор а НРО или разбавленный раствор аммиака. [c.164] Липазу адсорбируют на окиси алюминия или каолине из подкисленной 1 н. раствором уксусной кислоты глицериновой вытяжки поджелудочной железы свиньи. [c.164] Вытяжку взбалтывают с суспензией окиси алюминия и отделяют центрифугированием. Адсорбируется до 90% всей липазы. Сначала сорбат промывают раствором глицерина и затем два раза извлекают смесью растворов двузамещенного фосфорнокислого аммония, аммиака и глицерина. [c.164] При этом извлекаются имевшейся вначале липазы и 3,5% сопутствующей амилазы. [c.164] Аналогично выделяют липазу печени и липазу желудка . [c.165] Карбогидразы, например сахаразу, адсорбируют также на окиси алюминия или на каолине. [c.165] Отделение амилазы от трипсина производится двукратной адсорбцией каолином из слабого уксуснокислого раствора . [c.165] Энтерокиназа, находящаяся в верхних частях тонких кишек, может быть адсорбирована на гидроокиси алюминия из кислого раствора и таким путем легко отделена от трипсина. [c.165] Трипсин и эрепсин разделяются вследствие различной ад-сорбируемости этих ферментов окисью алюминия. Маточный раствор, остающийся после многократной адсорбции на окиси алюминия, не содержит эрепсина, который целиком удерживается смесью алюминия при полном отсутствии на нем трипсина, прошедшего в маточный раствор. Каолин также хорошо адсорбирует эрепсин из кислого раствора . [c.165] При pH раствора меньшем, чем изоэлектрическая точка ме-тилэстеразы, но несколько больше, чем изоэлектрическая точка полигалактуроназы, извлекается только последняя. [c.165] К действию кислот эти два энзима относятся различно. Описанный метод может быть применен для выделения и других энзимов . [c.165] В дрожжах были найдены две кодегидразы козимаза и коде-гидраза П. При хроматографической адсорбции на окиси алюминия из водного раствора кодегидраза И задерживается в верхней части колонки, в то время как козимаза при проявлении переходит в фильтрат. Зона кодегидразы Н флуоресцирует под действием ультрафиолетовых лучей. Подобным же образом кодегидраза II была выделена из бычьей печени . [c.165] Для разделения энзимов эмульсина водный раствор его пропускают через колонку боксита. При определенных условиях (ацетатный буфер рН=4,7) р-глюкозидаза легко и полностью адсорбируется и может быть затем вымыта из колонки 0,1 %-ным раствором аммиака при этом а-галактозидаза и хитиназа переходят в фильтрат. Повторная адсорбция нерколята на свежей колонке боксита позволяет разделить а-галактозидазу, остающуюся на колонке, и хитиназу, переходящую в перколят. Для вымывания из колонки а-галактозидазы применяют 0,1%-ный раствор аммиака. [c.166] Для адсорбции липазы и амилазы рекомендуется тальк для липазы и трипсина—боксит отдельно для липазы—графит для трипсина—карборунд и для амилазы и трипсина—силикат магния. [c.166] Адсорбцией на колонке трехзамещенного фосфорнокислого кальция может быть повышена активность каталазы. Каталазу, выделенную из печени лошади, растворяют в воде в количестве 0,2 мг мл. Раствор доводят до рН = 5,5 добавлением кислого фосфорнокислого калия и фильтруют через колонку трехзамещенного фосфорнокислого кальция. Каталаза адсорбируется в верхней части колонки в виде четкой полосы и может быть отмыта буферным раствором (рН = 8) . [c.166] Активный аллерген выделяют из муки хлопковых семян. После частичной очистки протеиновый компонент превращают в пикрат полученный продукт растворяют в 50%-ном этиловом спирте и адсорбируют на колонке из окиси алюминия. Аллерген вымывают из колонки 0,05%-ным раствором едкого натра . [c.166] Вернуться к основной статье