ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Определение микробной биомассы из "Микробиология" Наиболее популярным методом измерения биомассы является измерение содержания АТФ и общего содержания адениновых нуклеотидов с последующим пересчетом на содержание углерода клетки или массы сухого вещества. Метод позволяет быстро и точно (с люциферин/люциферазной пробой) измерить содержание АТФ в образце, причем количество АТФ строго соответствует биомассе живых клеток, так как после отмирания клетки пул АТФ в ней резко снижается или исчезает вовсе. Общий пул аденилатов (Аг = = АТФ + АДФ + АМФ) не зависит от метаболического состояния клетки и более полно соответствует содержанию биомассы в анализируемой пробе. [c.259] Другим методом является измерение содержания компонентов клеточных стенок (например, ацетилмурамовой кислоты (МК) или липополисахаридов). При оценке содержания мурамовой кислоты ее гидролизуют для высвобождения лактата, который определяют энзиматически. Установлено, что все грамположительные бактерии содержат 44 мкг МК/мг С клетки, тогда как для грамотрицательных клеток это соотношение равно 12 мкг/мг. Для оценки содержания грибной биомассы используют определение концентрации хитина, но на точность метода влияет количество почвенных членистоногих и насекомых. [c.259] При отсутствии в пробе растений можно определять биомассу фототрофных водорослей и бактерий, измеряя количество хлорофилла. По концентрации хлорофилла а судят о содержании биомассы водорослей и цианобактерий после экстракции пробы хлороформ/метанол ьной смесью с последующим измерением поглощения при 665 нм. Поглощение того же экстракта, измеренное при 850 нм, будет отражать количество всех бактериохлорофиллов, таким образом оценивают количество пурпурных фототрофных бактерий. Содержание различных хлорофиллов можно измерять и по спектрам флуоресценции. [c.259] Концентрация ДНК в клетках микроорганизмов довольно постоянна, поэтому ее определение также может способствовать измерению биомассы. В природных образцах, где чувствительность метода определения ДНК имеет первостепенное значение, применяют пробы с флуоресцентными красками, такими, как эти-диум бромид или Hoe hst 33258 с использованием спектрофлуо-рометрии. Перед измерением необходимо провести тщательную очистку тотальной ДНК, а также контроль на наличие эукариотической ДНК. [c.259] Белок определять легко, а бактериальные гемопротеины имеют характерную хемилюминесценцию. При определении белка следует убедиться, что фоновые концентрации белков незначительны. Поскольку различные микроорганизмы содержат разные количества белка, определение этого компонента биомассы целесообразно проводить в ситуациях, когда в пробе присутствует один вид микробов. [c.260] Наличие липидов служит хорошим маркером для определения биомассы, поскольку все клетки окружены мембранами, содержащими липиды. Количество эргостерола в пробе отражает содержание грибов, поскольку его практически не содержат ни растения, ни археи с бактериями. Определение концентрации и состава метиловых эфиров жирных кислот фосфолипидов позволяет наряду с оценкой общей биомассы найти концентрацию той или иной группы микроорганизмов в образце, взятом из природных ниш. [c.260] Физиологические методы определения биомассы основаны на измерении дыхания пробы после добавления субстрата или на измерении количества СО2, выделившегося в результате разложения микробной биомассы после стерилизации пробы при добавлении хлороформа. Оба метода требуют проведения многочисленных проверок. [c.260] Вернуться к основной статье