ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Фракционирование, основанное на различии изоэлектрических точек из "Химия белка" Меняли деревянный ящик, разделенный на три камеры двумя мембранами, приготовленными из льняной ткани, вымоченной в 30%-ном растворе желатины и задублен-ной в формальдегиде в течение ночи. Электродами служили угольные пластины. Во время опыта Фостер и Шмидт поддерживали в центральной секции pH, равное 7,5, я щелочность катодного отделения понижалась добавлением серной кислоты.. Лргинин и лизин мигрировали к катодной секции, если же pH поддерживалось при 5,5, там концентрировался даже гистидин. Католит содержал около 15% неосновного азота, который мо1 быть удален при повторном пропускании раствора. Пигмент, образованный при 1идролизе,. мш рирует в анодное отделение и не влияет на анализ основных а.мино-кислот. [c.241] В последующие годы [35] исследование было распространено на другие белки казеин, фибрин и белок красных кровяных клеток. В.место добавления серной кислоты в катодное отделение, через него пропускалась двуокись углерода. Содержимое средней секции охлаждалось проточной водой и перемешивалось. Полнота разделения зависела от времени, но для препаративных целей достаточно было ограничиться переносом 90% гексонового основания к катоду. После второго пропускания раствора он содержал от 98,5 до 100% основного азота. [c.241] Исследовалось также выделение кислых аминокислот [26]. При анализе смеси аспара иновой кислоты и тирозина последний не был найден в анодном пространстве, а выход аспарагиновой кислоты составил около 88%. В опытах с аспарагиновой кислотой, глютаминовой кислотой и тирозином выход был выше 96%, но были также найдены следы тирозина. Перенос нейтральных аминокислот в анодном пространстве не наблюдался вовсе или происходил лишь в незначительной мере они были найдены в катодном отделении. Это должно быть приписано электроосмосу, который вызывает течение воды от анода к катоду. [c.241] Если опыт начинался при нейтральной реакции, фракция I практически не содержала Еистидина, тогда как фракция III содержала все это вещество. Фракция II обрабатывалась вторично, пока гистидин не начинал проникать в катодное пространство. Затем она соединялась с фракцией I, а центральная секция — с фракцией 111. Содержимое катодного пространства отбрасывалось. [c.243] Кейль и Шик [56] применяли в качестве диафрагмы трубки из пористой керамики. В их опытах применялись большие объемы и чрезвычайно сильные токи. Было описано непосредственное выделение гликохолевой кислоты из желчи и удаление солей креатинпна из мясного экстракта Либиха. [c.243] Гаврилов с сотрудниками при помощи прибора, показанного на рис. 18, количественно изучили распределение азота в различных секциях в опытах с различными катодами, плотностями тока и при различной продолжительности опыта. Было показано, что плотность тока на катоде не должна превышать 10— 13 JмA м , иначе аминокислоты начинают дезаминироваться и освобождается повышенное количество аммиака. Хорошие результаты были получены с платиновым, серебряным и ртутным катодами, никель же приводил к потере аммиака для того чтобы сократить продолжительность разделения, оказалось необходимым во время опыта вводить двуокись углерода в катодную секцию. Продолжительное прохождение тока не являлось желательным вероятно, при этом ангидриды диффундируют в анодное пространство и там окисляются, что приводит к значительной потере азота. Для получения полного разделения нейтральных ангидридов от аминокислот необходимо было повторять процесс разделения содержимого катодного пространства от двух до трех раз. Сильно кислую аспарагиновую кислоту целиком к катоду [ ереиести не удавалось. [c.244] Андерсон применил прибор из пяти секций, сделанный из эбонита. На дне каждой секции он вывел трубки с кранами, а перемешивание достигалось пропусканием воздуха через раствор. Андерсон уделил большое внимание выбору мембран. После интенсивных поисков он нашел, что наилучшим материалом является специальный сорт бумаги (прежняя гемпширская денежная бумага ), смоченной теплой водой. [c.245] С целью воспрепятствовать диффузии нейтральных аминокислот в электродное пространство, Кросс [27] ввел две предохранительные секции между центральной и анодной, и две — между центральной и катодной секциями. Между двумя предохранительными секциями получался противоток жидкости в направлении центра, причем течение было достаточно быстрым, для того чтобы относить назад диффундирующие аминокислоты, ио в то же время достаточно медленным, для того чтобы не мешать переносу кислых и основных аминокислот. Для ограниченного лабораторного применения прибор является слишком сложным. [c.245] Основные аминокислоты желтого фермента были изолированы с помощью переноса в электрическом поле и количественно определены Куном и Денуэллом [60]. Они применяли электродиализатор Паули, погруженный в ледяной термостат. Катодное отделение дважды опорожнялось и наполнялось водой, различные фракции собирались, концентрировались и пропускались повторно через прибор для удаления неосновных аминокислот, которые мигрировали к катодной камере при первом пропускании. [c.245] Подобно прежним исследователям, Гордон, Мартин и Снндж не испытывали трудностей при электрофоретическом переносе всех основных компонентов в катодное пространство, но там также были найдены значительные количества нейтральных компонентов. Лучшие результаты были получены при измерении pH в центральной секции и прибавлении по каплям аммиака для поддержания нейтральной реакции. Тем не менее оказалось необходимым повторять разделение католита дважды, для того чтобы количественно удалить все нейтральные компоненты. [c.247] В своем более позднем сообщении Гордон, Мартин и Синдж [44] также описали изолирование нейтральной фракции пептидов. Кислотные и основные вещества количественно удалялись повторной заменой католита и анолита дестиллированной водой. При этом некоторые потери нейтральных аминокислот и пептидов были неизбежны, но предполагалось, что эти потери были неизбирательнымн и не из.меняли заметно соотношения составных частей в нейтральной фракции. [c.247] В опытах Теорелла и Акессона перед электролизом все ионы хлора удалялись и замещались ионами сульфата, так как хлор, выделявшийся на аноде, разрушал кислые аминокислоты, собирающиеся в анодной камере. Теорелл и Акессон работали с очень малыми количествами вещества (20—30 мг белка) с ошибкой опыта около 1%, если применялась хорошая мембрана и еслн опыт повторялся как в отношении анолита, так п католита. С указанно точностью были получены данные для четырех фракций анодной, нейтральной, основной и амидного азота. Таким образом, кислотные аминокислоты количественно переносились в анодную камеру. [c.249] Вильямс и Трусдэйл [150] применили метод Вильямса I Уотермана для разделения витаминов дрожжей. Их прибор показан на рис. 22. Мембраны были заменены сифонами с кранами. Они указали на необходимость наличия в, системе очень малого количества солей для получения резкого разделения. Если в конечных и соседних с ними камерах собираются большие количества кислоты и щелочи, то разделяемые амфолиты переносят только малую часть тока. [c.252] Обзор метода фракционированного переноса в электрическом поле как средства биохимического исследования был дан Вильямсом в 1935 г. [147]. Аппарат на рис. 23 был подвергнут критике из-за трудности охлаждения и невозможности устранить испарение и загрязнение двуокисью углерода из воздуха. Так как применение мембран осложнялось электроосмосом, был сконструирован прибор, состоящий из ряда стеклянных цилиндров и стеклянных дисков. Часть этого прибора показана на рис. 23. Сравнительно большие отверстия в дисках понижают электроосмос до незначительной величины, хотя они в то же время достаточно малы для предотвращения смешения от диффузии, если они закрываются немедленно после окончания опыта. Вильямс показал, что при этo, [ можно поддерживать отчетливо кислую и основную реакции в двух соседних камерах. [c.252] Вернуться к основной статье