ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Стабилизация границы силой тяжести из "Химия белка" В связи с некоторыми опытами на белковых смесях Тизелиусом [135] было указано, что электрофоретический метод разделения веществ обладает несомненными преимуществами по сравнению с классическими методами осаждения. Последние вызывают довольно сильные изменения в состоянии раствора, который, возможно, испытывает частичную денатурацию. [c.275] В 1933 г. Бенн-холд [11] описал разделение смеси близких белков. Он применял прибор Михаэлиса и после того, как перенос происходил достаточное время, он погружал капиллярную пипетку с слегка нагретым шариком в /-образную трубку, при охлаждении пипетка всасывала фракцию белка, находящуюся на ее конце. [c.275] Электрофоретический прибор Теорелла [129], изображенный на рис. 38, хотя и был построен для аналитических целей путем изучения переноса биологически активных веществ в электрическом поле, может служить также и микропрепаративным прибором, /-образная трубка этого прибора состоит из ряда секций, которые могут быть отделены друг от друга при помощи эбонитовых пластинок. [c.275] Не представляется возможным упомянуть все описанные в литературе приложения нового прибора Тизелиуса. При описании прибора Тизелиус [136] одновременно описал отделение фикоцианина от фикоэритрина. Несколько позже [137] он описал электрофоретическое разделение серумальбумина и недавно открытых компонентов глобулина а, и У- Эти работы были тем более интересны, что различия в подвижности были довольно малы. Мы цитируем из статьи Тизелиуса Фракции альбумина глобулин а, которая была собрана из ряда опытов с неразбавленным серумом, диализовалась с фосфатным буфером при pH 8,04 и вновь разделялась в приборе при электродных сосудах большой емкости при 400 V (9,7 V на см). Наблюдаемое разделение между двумя границами составляло 4,8 мм в час. Компенсация в 22 мм в час делала скорости переноса в противоположных направлениях приблизительно равными. При изменении напряжения и при периодической остановке компенсационных часов приходилось вводить лишь небольшие поправки, контролируемые оптическими наблюдениями. Через 24 часа опыт прерывался и секции прибора опорожнялись. Граница альбумина была при этом несколько выше вершины верхней положительной секции, граница глобулина (которая получается очень диффузной) была все время внизу в /-образной трубке. Этим путем получено 8 мл чистого серумальбумина 2,1% концентрации и 8 мл раствора глобулина, который, однако, был довольно разбавлен (0,2%). [c.281] Аналогичные явления наблюдались и в других коллоидных растворах [62, 101]. Они наблюдались также при попытках выделить осажденное антитело из раствора специфического преципитата [120]. Наблюдаемые границы были очень расплывчаты, тем не менее ббльпшя часть чистых антител была выделена в свободном виде. [c.282] Тизелиус [138] также сконструировал специальный препаративный прибор для проведения операций в более крупном масштабе. Он был построен на тех же принципах, что и аналитическая модель, но в десять раз больших размеров. Этот прибор изображен на рис. 41. [c.283] Электродные сосуды имели емкость по 5 л каждый вследствие своих больших размеров они находились вне холодильной ванны. Соединительные трубки между /-образной трубкой и электродными сосудами были согнуты, чтобы предохранить от попадания в электродные сосуды более холодного и тяжелого раствора из /-образной трубки если бы это имело место, происходило бы перемешивание раствора хлорида вокруг электродов. [c.283] Удаление получающихся продуктов из прибора производилось следующим образом (рис. 42) после конца опыта нижняя ячейка сдвигается в сторону для предотвращения течения через /-образную трубку, электродные сосуды разъединяются и буфер, находящийся над границами, удаляется. [c.284] не допуская конвекции, фракции отбирают одну за другой с помощью специальной пипетки со стеклянным фильтром на конце. Пипетка соединена с особым засасывающим устройством. Вследствие неизбежного нарушения границ при прохождении пипетки через жидкую границу было найдено более удобным не удалять буфер, находящийся над границами пипетка передвигалась вниз к границам при помощи зубчатого устройства сразу после сдвига нижней ячейки. [c.284] Подлежащий фракционированию раствор помещается в часть О /-образной трубки, соединенной с частями С и Е резиновыми трубками с резиновыми зажимами. М ц. N — два мерных цилиндра, содержащих раствор хлористого калия и электроды серебро — хлористое серебро. Сифоны 1, 5г, 5з и 4 служат для пропускания тока и для выравнивания уровней жидкости. Сифон вставляется перед открытием /-образной трубки и удаляется непосредственно перед началом опыта. Границы образовывались при медленном и осторожном открытии зажимов А и В. Трубка С имеет пять отверстий на равном расстоянии друг от друга, которые во время опыта закрыты коллодием. Белкам дают мигрировать вверх по трубке С, и опыт прекращают, когда наиболее быстро движущаяся граница достигает Н. При работе с концентрированными растворами границы могут наблюдаться визуально, но Машебеф и Монье [64] описали простой метод наблюдения электрофоретических границ, который пригоден для этого прибора. Для отбора фракций зажимы А В закрываются, сифоны удаляются и фракции отсасываются шприцем, иглу которого протыкают через коллодиевую пленку. [c.286] В 1942 г. Свенссон [119] описал прибор для препаративного электрофореза с рядом новых усовершенствований, в котором соединил положительные стороны аналитического прибора Тизелиуса с требованиями работы с большими объемами и с большим удобством обращения. В последние годы прибор был еще более усовершенствован, и его устройство можно видеть на рнс. 44. [c.286] Аппарат Свенссона (1946). [c.287] Разделение проводится с оптическим контролем, так же как и в аналитической модели. Вследствие значительной длины колен /-образной трубки (20 см) линзы были бы слишком дорогими вместо этого применяют оптическую систему с вогнутым зеркалом сзади прибора, как описано автором. I — черный экран с тремя вертикальными щелями одна — для основной линии и две — для двух колен, объем /-образной трубки составляет около 70 МЛ, в первой фазе разделения в прибор вводится 40 мл раствора. Если имеется больше вещества, оно накачивается внутрь в то же время, когда отсасываются фракции раствора после первого разделения. Таким путем разделение может продолжаться до тех пор, пока вещество не исчерпается прибор, таким образом, пригоден для любого объема, большего 40 мл. Можно сказать, что разделение протекает полунепрерывно. [c.288] До сих пор не опубликовано данных о практическом приложении нового принципа Фильпота. Как он сам указал, прибор требует многих улучшений, но, вероятно, скоро станет возможным получать этим путем чистые белки в больших количествах. [c.289] Вернуться к основной статье