ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы МЕТОДЫ РАБОТЫ С КОСТНОЙ ТКАНЬЮ из "Подготовка биологического материала лдя молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел" При массовом поступлении биологического материала на молекулярно-генетический анализ до 55% биологических образцов представлены костными фрагментами, из них 98% — фрагменты трубчатых костей. Этому есть несколько причин. Во-первых, часто приходится работать с трупным материалом с выраженными гнилостными изменениями. Следует учитывать, что, деполимеризация ДНК мягких тканей и жидкостей тела человека начинается уже в течение первых суток, с момента наступления смерти, тогда как известны случаи успешной экстракции ДНК из костных останков людей, умерших десятки, сотни и даже десятки тысяч лет назад. [c.117] Во-вторых, кости содержат достаточное количество ДНК для молекулярно-генетической идентификации методами ПЦР-анализа. [c.117] В третьих, кость можно подвергать жесткой стерилизации с использованием высоко реак-ционоспособных соединений, таких как NaO l, хлорамины и др., разрушающие ДНК внешних тканей, что существенно снижает риск контаминации при работе с биологическим материалом. [c.117] Костные ткани содержат три вида клеток, основными из которых являются ядросодержащие остеоциты (в 1 мм костной ткани содержится примерно 20 — 26 тыс. остеоцитов), в цитоплазме каждого из которых имеется несколько митохондрий. [c.118] Первый этап обработки костных фрагментов — это их очистка от остатков костного мозга, мышечных тканей и сухожилий и обработка активными хлорсодержащими соединениями. Затем следует дробление и помол костных осколков. Эта стадия является очень важной, т.к. эффективность экстракции ДНК обратно пропорциональна размеру частиц костной пыли. [c.118] Рисунок 8. Схема строения трубчатой кости (по Елисееву В.Г., 1970). [c.119] Если по каким-то причинам не тся получить достаточное количество ДНК 1 костного фрагмента, тогда целесообразно I провести предварительную декальц стной ткани (если мы не имеем деле образцом). В данном случае имеется кислотная декальцинация, так как в де происходит апуринизация ДНК и, деградация нуклеиновых кислот. [c.120] На продолжительность действия декальцинирующих растворов влияют несколько факторов, основными из которых является 1) размер частиц костной пыли, 2) концентрация активного агента, 3) температура, при которой протекает процесс декальцинации, и 4) механическое перемешивание, ускоряющее доступ хелатора к костному порошку. При наиболее оптимальном варианте ткань необходимо извлекать из декальцинирующей жидкости немедленно после того, как из кости удалены последние следы минералов. Для этого необходимо постоянно наблюдать за ходом декальцинации. [c.123] В определенных случаях, единственно доступным вещественным доказательством является зуб. В этом случае, для повышения эффективности экстракции ДНК, важно знать, в какой части зуба ее содержание максимально. [c.124] Зуб состоит из твердых и мягких тканей. В твердой части зуба различают эмаль, дентин и цемент мягкая часть представлена так называемой пульпой (рис. И). [c.124] Эмаль в основном состоит из неорганических солей, органическая же часть дентина представлена в основном коллагеном. Таким образом, ни дентин, ни эмаль практически не содержат ДНК. Цемент, покрывающий корень зуба и шейку, по химическому составу приближается к кости и содержит клетки — цементоциты. [c.124] Рисунок и. Дентин и пульпа зуба (по Елисееву ВТ., Афанасьеву Ю.И. и др., 1983). [c.125] Ниже приводятся методы экстракции ДНК из костной ткани и зубной пульпы, которые нашли широкое применение на базе 124 ЦЛМКИ. [c.126] Вернуться к основной статье