ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Методы количественного определения аневрина из "Витамины" Для количественного определения аневрина предложено большое количество отдельных реакций и тщательно разработаьшых Методов. Мы опишем здесь лишь наиболее распространенные. [c.67] Всеобщее признание получил флуорометрический метод (15, 16). Ниже мы излагаем описание фЛуорометрического метода в том виде, как он применяется в ряде научно-исследовательских и производственных лабораторий. [c.67] В основе метода лежит описанная нами реакция превращения аневрина в тиохром и измерение интенсивности флуоресценции образовавшегося тиохрома. Реакция протекает количественно, а само определение при некотором навыке дает вполне точные и удовлетворительные результаты. [c.67] Навеску образца в количестве 1—10 г (в зависимости от ожидаемого содержания витамина) растирают в ступке с 0,1 iV раствором HjSO, и переносят в колбу, доводя объем тем же раствором приблизительно до 75 мл. Колбу ставят на гидролиз в кипящую водяную баню на 45 минут, время от времени помешивая. [c.67] Колбу закрывают ватной пробкой и помещают на ночь в термостат (в темноте) при 37°. [c.67] Содержимое колбы доводят до объема водой (до 100 мл) и фильтруют. Из фильтрата отбирают пробы на определение витамина В1. [c.68] Н1екоторые авторы (Мурри и др.) прибавляют к вытяжке 2 мл метанола, чтобы избежать разрушения тиамина при возможно большом количестве внесенного в вытяжку окислителя. При визуальном просмотре флуоресценции на флуороскопе не приходится пользоваться бланковым опытом (без внесения в вытяжку окислителя), который служит для определения поправки на реактивы и на флуоресцирующие примеси (которые не были удалены при предварительной обработке вытяжки изобутанолом), так как эта флуоресценция бывает настолько слаба, что несравнима даже со слабым. (В ОД у) эталоном стандартной шкалы. [c.68] Приготовляют 10 мг%-ный раствор тиамин-хлорида в 0,001 N 25f/o-HoM спиртовом растворе НС1. [c.69] Для приготовления эталона, содержащего 1 у, берут 1 мл разведенного раствора тиамин-хлорида, добавляют 3 мл воды, чтобы довести общий объем жидкости до 4 мл одинаково с исследуемым образцом. Дальнейшее окисление и экстракцию проводят так, как описано выше. Для приготовления эталонов шкалы достаточно брать по 0,1 мл окислителя. [c.69] Навеску тонко измельченного (растертого в ступке, размолотого на мельнице или в мясорубке) материала, содержащего от 10 до 25 у аневрина, помещают в колбочку с обратным воздушным холодильником, прибавл 1 т 40—80 мл 1 %-ной НС1, тщательно перемешивают, нагревают до кипения и кипятят 1—2 мин. По охлаждении приводят к желаемому объему (50—100 мл) и часть экстракта отфильтровывают. [c.70] Растворы П и П1 центрифугируют до полного отделения спиртового слоя, собирают спиртовой слой в те же цилиндры, промывают встряхиванием с 4 мл воды, переносят в центрифужные пробирки и вновь центрифугируют. Спиртовой слой вновь переносят в цилиндры, доводят до 15 мл изобутиловым спиртом и сушат фильтрованием через обработанную бутанолом сухую гигроскопическую вату. [c.70] Примечание. Часто растительные вытяжки, несмотря на указанную обработку, остаются окрашенными, что мешает установлению количества раствора красной кровяной соли, потребной для окисления всего аневрина. В таком случае нужно брать ряд одинаковых объемов испытуемого раствора (не менее трех) и обрабатывать, как указано для 3-го раствора, но с прибавлением разного количества окислителя (0,1 0,5 1 мл) и из них отобрать для определения флуоресценции наиболее интенсивно флуоресцирующую пробу. [c.70] Приготовляют водный раствор кристаллического аневрина, содержащий точно ] или 2 Y витамина в 1 мл. Этот раствор устойчив при хранении на холоду и в темноте в течение 1 мес. [c.71] К 1 мл исходного раствора добавляют 2 мл метанола и, при перемешивании, 0,05—0,1 мл J %-ного раствора КзРе(СК)в и 1 мл 30 %-ного раствора NaOH. Оставляют в покое в течение I мин., затем встряхивают с 12 мл изобутилового спирта в течение 1—2 мин., выливают в центрифужную пробирку и заканчивают процедуру, как указано выше. Содержание аневрина в 1 мл этого раствора вычисляют путем Деления количества микрограммов взятого аневрина в растворе на 15 (объём полученного спиртового раствора). Этот раствор наливают в микробюретку. [c.71] Две пробирки (одна из них содержит точно 5—10 мл контроль ного опыта, другая—такое же количество испытуемого раствора) освещ ают ультрафиолетовыми лучами перед черным светофильтром ртутно-кварцевой лампы. В пробирку с холостым опытом прибавляют из микробюретки по каплям стандартный окисленный раствор аневрина до тех пор, пока флуоресценция в обеих пробирках не уравняется. В пробирку с испытуемым раствором приливают такое же количество чистого изобутилового спирта (для уравнивания объёмов). [c.71] Расчет содержания аневрина в испытуемом растворе производится весьма просто, так как при равенстве объёмов прибавленного из микробюретки стандартного окисленного раствора аневрина к холостому опыту содержание аневрина будет равно тому количеству его, которое содержится в объеме испытуемого раствора, взятого для флуорометрирования. [c.71] Вернуться к основной статье