ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Титрование бактериофага из "Микробиология с техникой микробиологических исследований изд.4" После выявления бактериофага в исследуемом материале необходимо определить его количественное содержание или, как Принято говорить, найти титр фага. [c.77] Для выражения титра бактериофага можно пользоваться двумя показателями количеством активных корпускул бактериофага, содержащихся в 1 мл исследуемой жидкости бактериофага, или величиной наибольшего разведения исследуемой жидкости, при котором бактериофаг проявляет свое л -тическое действие. Полученную при этом величину выражают отрицательным логарифмом 10, тде степень указывает разве- дение фага. Средний титр бактериофага составляет 10 . [c.77] Для титрования бактериофага предложены различные методы, однако наибольшее распространение получили способ титрования фага в жидкой питательной среде, предложенный Аппельманом, и метод агаровых слоев Грациа. [c.78] Титрование бактериофага в жидкой питательной среде по методу Лппельмана. Метод Аппельмана основан на внесении различных количеств титруемого бактериофага в бульон, засеянный одной и той же дозой культуры гомологичных микробов, с целью получения феномена бактериофагии. [c.78] Во все 10 пробирок приготовленного ряда разведений В НО-сят по 0,2 мл 18—24-часовой бульонной культуры бактерий, одноименных титруемому фагу. Прибавляемая культура не должна содержать устойчивых к фагу клеток. [c.78] Густота микробной взвеси, прибавляемой в пробирки с титруемым бактериофагам, существенного значения не имеет, так как опытным путем (Л. Д. Переметина) было установлено, что изменение микробной концентрации в пределах 100000—4 500 000 в 1 мл не оказывает заметного влияния па исход титрования бактериофага. Пробирка 11-я — контроль культуры, содержит 5 мл бульона и 0,2 мл бульонной культуры микробов. Пробирка 12-я — контроль на стерильность, содержит 5 мл бульона без добавления культуры и фага. Штатив с пробирками помещают в термостатчпри 37 °С на 18—20 ч. [c.78] Учет результатов производят через 18—20 ч после инкубации в термостате при 37°С. Титром считают то максимальное разведение бактериофага, при котором наблюдается нолиый лизис чувствительной к нему культуры. Практически это соответствует той последней пробирке в ряду, в которой бульон еще остается совершенно прозрачным. [c.78] Накануне постановки опыта готовят питательные среды. В чашки Петри разливают 1,5% мясо-пептонный агар в количестве 25—30 мл. Для подавления роста воздушной микрофлоры к расплавленному агару перед разливкой прибавляют 0,004% спиртовой раствор генцианового фиолетового из расчета 0,1 мл краски на каждые 100 мл мясо-пептонного агара. Агар покрывают стерильной фильтровальной бумагой и подсушивают 30. мин в тер.чостате или 2—3 ч при комнатной температуре, после чего закрывают крышкой и оставляют на ночь в комнате. [c.79] Подготовленный агар должен быть совершенно сухим, так как даже незначительное увлажнение может изменить количественные показатели содержания корпускул фага в исследуемой жидкости. [c.79] Мясо-пептонный агар 0,7%, разлитый в пробирки по 2,5 мл и простерилизованный в них, может быть приготовлен за несколько дней до постановки опыта. Количество чашек Петри, как и пробирок с 0,7% мясо-пептонным агаром, должно соответствовать числу пробирок с разведением фага. [c.79] В день постановки опыта из жидкости, содержащей титруемый фаг, готовят в пробирках ряд последовательных десятикратных разведений (так же, как при титровании фага на жидких средах по методу Аппельмана). Для разведений фага можно пользоваться стерильным бульоном или изотоническим раствором хлорида натрия. [c.79] Вернуться к основной статье