ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Молекулярная масса белков из "Основы биохимии" Определение молекулярной массы белка гравиметрическим методом ведут в аналитических ультрацентрифугах (рис. 15). Принцип количественного изучения размеров взвешенных частиц в центробежном поле А. В. Думан-ский выдвинул еще в 1913 г., и он же пытался определить размеры частиц по скорости оседания в обычных лабораторных центрифугах. Однако первая ультрацентрифуга с оптической приставкой, позволяющей наблюдать и фотографировать процесс седиментации (оседания) частиц, была построена шведским физико-химиком Т. Сведбергом десятью годами позже. При вращении ее ротора развивалось центробежное ускорение, превышающее ускорение силы тяжести всего в 150 раз. [c.35] Исследуемый раствор белка помещают в небольшую прозрачную для световых лучей ячейку, которую вставляют в специальное гнездо ротора. Молекулы белка в этой ячейке под действием центробежной силы, развиваемой при вращении ротора, постепенно оседают на дно. Фотоприставка к ультрацентрифуге позволяет делать снимки содержимого ячейки через определенные промежутки времени и определять таким образом скорость оседания белковых частиц. Определение молекулярной массы белка методом ультрацентрифугирования ведут двумя способами по скорости седиментации белковых молекул и по седиментационному равновесию. [c.36] Из остальных перечисленных выше физических методов определения молекулярной массы белков широко применяют еще два гельфильтрационный и электрофоретический. [c.36] Первый состоит либо в определении объема элюента, необходимого для выноса белка из колонки с гелем сефадекса (К ), и соотнесении его со свободным объемом колонки (1 о). либо в установлении длины пробега белка в тонком слое сефадекса на пластинке. И тот и другой показатели связаны зависимостью со значением молекулярной массы белка. Пользуясь калибровочными графиками, построенными по Уо или по длине пробега маркерных (т. е. с известной молекулярной массой) белков, находят молекулярную массу исследуемого белка. [c.36] Второй метод состоит в измерении пути, пройденного белком при электрофорезе в полиакриламидном геле здесь тоже существует зависимость между молекулярной массой белка и длиной пробега. Еще более отчетливо она выявляется при сопоставлении торможения пробега белка при переходе от электрофореза его в геле с меньшим содержанием акриламида к электрофорезу в геле с большим содержанием акриламида. В этом случае также строят калибровочные графики по маркерным белкам и по ним находят молекулярную массу неизвестного белка. [c.37] Другие физические методы определения молекулярных масс белков по светорассеянию, вязкости и осмотическому давлению белковых растворов, по данным рентгеноструктурного анализа и электронной микроскопии—используют крайне редко. [c.37] Некоторое распространение имеет химический метод. Супщость его заключается в количественном определении в составе белка элемента или аминокислоты, содержащихся в нем в наименьшем количестве. Затем проводят расчет минимальной молекулярной массы, исходя из того, что в молекуле белка не может быть менее одного атома элемента или одного аминокислотного остатка. Однако об истинной молекулярной массе белка этот метод не всегда дает правильное представление. Например, гемоглобин (белок крови человека и животных) содержит 0,34% железа. Так как в гемоглобине не может содержаться менее одного атома Ре, то минимальная молекулярная масса гемоглобина рассчитывается по пропорции 0,34 части Ре соответствует 100 частям белка, 56 частей Ре (один атом) соответствуют х частям белка, отсюда л =(56-100)/ 0,34 = 16 500. Истинная молекулярная масса гемоглобина равна 66 ООО—68 ООО, т. е. учетверенной минимальной молекулярной массе. Это естественно, так как молекула гемоглобина содержит. 4 атома Ре. Таким образом, химический метод определения молекулярной массы белков в определенной мере условен. [c.37] Вернуться к основной статье