ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Универсальные методы введения плазмид из "Генетическая инженерия" Так как плазмида входит в протопласт в виде двухцепочечной молекулы, система рестрикции-модификации клетки-реципиента будет существенно снижать эффективность трансформации при наличии в плазмиде соответствующих сайтов рестрикции. Аналогичная ситуация возникает также при введении в протопласты хромосомной ДНК. [c.239] Таким образом, с точки зрения введения плазмид в клетки протопласты бацилл, как и других грамположительных бактерий, имеют ряд несомненных преимуществ перед компетентными клетками. Протопласты с высокой эффективностью трансформируются мономерной формой плазмидных ДНК, что очень важно при конструировании гибридных молекул ДНК in vitro. Кроме того, используя протопласты, часто удается вводить плазмиды в штаммы грамположительных клеток, не обладающих физиологической компетентностью. Недостатками данного методического приема являются его относительная сложность, многоэтапность и, как следствие, слабая воспроизводимость по параметру эффективности трансформации. [c.239] Более прост и )шиверсален метод электропорации, который начиная с 1988 г стали использовать для бактерий рода Ba illus. По эффективности электропорация примерно соответствует методу протопластов, но значительно проще и быстрее в исполнении. Тем не менее для каждого вида (штамма) процедуру электропорации необходимо оптимизировать, чтобы добиться наибольшего уровня плазмидной трансформации. [c.239] Таким образом, разработанный подход позволяет достаточно легко переносить гибридные плазмиды из Е. oli в разные грамположительные бактерии, которые не обладают физиологической компетентностью. Более того, в процессе конъюгационной передачи в клетку-реципиент переносится одна цепь донорной плазмиды, на которой синтезируется затем комплементарная цепь ДНК. Это приводит к тому, что конъюгационно передаваемая плазмида не подвергается атаке рестриктаз — эндонуклеаз, специфично воздействующих на немодифициро-ванные двухцепочечные молекулы ДНК. [c.239] Вернуться к основной статье