ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Конструирование in vivo гибридных вирусов простого герпеса из "Генетическая инженерия" Данную систему применили для встройки в геном вируса экзогенных фрагментов ДНК. При этом для эффективной селекции гибридных вирусов использовали ген tk HSV-1, так как он относится к несущественным генам и имеются простые и надежные методы отбора ТК -и ТК -вариантов. Например, вирусы с фенотипом ТК отбирают на культуре клеток с поврежденным геном тимидинкиназы при введении в культуральную среду аналогов тимидина типа бромдезоксиуридина или тимидинарабинозида (АгаТ). В таких условиях потомство формируют только ТК -вирусы (подробнее см. 13.3.1). [c.386] В первых модельных экспериментах (1980 г.) было показано, что инактивированный in vitro делецией или встройкой экзогенной ДНК клонированный в плазмиде ген тимидинкиназы HSV-1 может быть легко перенесен в геном вируса простого герпеса котрансфекцией клеток ТК гибридной плазмидой и вирусной ДНК (tk ). Рекомбинантное вирусное потомство с фенотипом ТК селектировали на среде с АгаТ. [c.386] Данная работа со всей очевидностью продемонстрировала возможность использования вируса простого герпеса в качестве экспрессирующего вектора. В связи с этим следует еще раз отметить, что HSV-1 имеет широкий круг чувствительных культур клеток, размножается в них с высокой эффективностью и может детерминировать продукцию чужеродных белков с последующим лизисом зараженных клеток, что в ряде случаев будет облегчать очистку целевых белков. [c.387] Предложенный и опробованный на примере HSV-1 метод рекомбинационной встройки in vivo в крупный геном чужеродной ДНК, фланкированной последовательностями, гомологичными несущественным областям этого генома, является достаточно общим, и в дальнейшем его использовали при встройке генов в ДНК других герпесвирусов и вирусов других семейств. [c.387] Вернуться к основной статье