ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Разделение на колонках с анннанитами на основе аминоцеллюлозы из "Химия гемицеллюлоз" Обычные синтетические анионообменные смолы оказались малодейственными при разделении полисахаридов гемицеллюлоз. Полисахариды из-за больших размеров молекулы задерживаются смолами лишь на поверхности зерен и по этой причине обменная емкость их используется лишь в незначительной степени. [c.46] Основные производные целлюлозы, такие, как диэтиламино-этилцеллюлозы ДЭАЭ-целлюлоза), большая поверхность которых легко доступна, оказались пригодными для фракционирования как кислых, так и нейтральных полисахаридов. Найдено, что кислые полисахариды адсорбируются ДЭАЭ-целлюлозой при pH примерно 6. Адсорбированные ДЭАЭ-целлюлозой полисахариды удаляются из колонки последовательным вымыванием буферными щелочными растворами нарастающих концентраций, а затем кислыми растворами возрастающих концентраций. [c.46] Нейтральные полисахариды адсорбируются лишь в щелочной среде ДЭАЭ-целлюлозой в основной форме, где они приобретают слабый отрицательный заряд. Элюирование в этом случае проводят щелочными растворами возрастающих концентраций. Нейтральные полисахариды можно фракционировать, также используя свойство полисахаридов давать отрицательно заряженные боратные комплексы. В этом случае используют ДЭАЭ-целлюлозу в боратной форме. Полисахариды, образующие боратные комплексы, задерживаются на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой и элюируются из колонки растворами бората возрастающей концентрации. Нейтральные по-лисариды, не образующие боратных комплексов, не задерживаются ДЭАЭ-целлюлозой. [c.46] Для фракционированного разделения смеси полисахаридов необходим предварительный подбор условий наилучшего разделения для каждой смеси, так как адсорбция ДЭАЭ-целлюлозой зависит от структуры и свойств разделяемых компонентов. [c.46] В гомологическом ряду линейных полисахаридов вещества с низким молекулярным весом удерживаются менее прочно, чем высокомолекулярные [29], увеличение числа кислотных групп в молекуле полисахарида способствует их адсорбции ДЭАЭ-целлюло-зой. Линейные полисахариды удерживаются прочнее разветвленных [28]. В ряде случаев исследователям самим приходится готовить аминоцеллюлозу, поэтому ниже приводим метод приготовления ДЭАЭ-целлюлозы [30]. [c.46] Для наполнения колонки ДЭАЭ-целлюлозу размешивают с водой, удаляют воздух отсасыванием в эксикаторе и полученную взвесь помещают в колонку, где она постепенно оседает. Колонку промывают водой или тем раствором, которым предполагается элюировать полисахариды. [c.47] Применяют- колонки диаметром от 0,5 до 2 см. Внизу колонки помещают стеклянную вату, а затем слой кварцевого песка. [c.47] Фракционирование полисахаридов на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой (31] проводят следующим образом. В колонку полисахариды вводят в виде водного раствора максимальной концентрации. Вначале ДЭАЭ-целлюлозу в колонке промывают водой, чтобы определить, удерживаются ли полисахариды этой целлюлозой. После этого проводят ступенчатое или непрерывное градиентное элюирование. Непрерывное градиентное элюирование позволяет определить число фракций и концентрации электролитов, необходимые для ступенчатого элюирования каждой из этих фракций. Ступенчатое вымывание позволяет лучше разделить полисахариды на фракции, чем непрерывное градиентное элюирование. Скорость протекания элюента через колонку не должна превышать 1,5 мл в минуту. Фракции объемом 10—20 мл собирают обычно с помощью автоматического коллектора. [c.47] Рассмотрим применение этого метода при разделении смеси полисахаридов. Например, необходимо было разделить смесь полисахаридов, которая состояла из галактоглюкоманнана (65%), содержащего ацетильные группы, ксилана и других полисахаридов [32]. [c.47] Колонку размером 4X40 см, наполненную порошком ДЭАЭ-целлюлозы, промывали 0,5 М фосфатным буфером с pH 5,5 и водой. Растворяли 3 г смеси полисахаридов в 20 мл воды и вносили в колонку. При промывке содержимого колонки 3 л воды получили фракцию полисахаридов I, при последующей промывке 3 л 0,05 М раствора однозамещенного фосфата натрия выделили фракцию II. Затем промывали содержимое колонки 2 л 0,5 М раствора одио-замещенного фосфата натрия (или лучше ацетатом калия) и получили фракцию III, при промывке 2 л 0,1 М раствора едкого натра, наконец, выделили фракцию IV. [c.47] Фракции I и П содержали только галактоглюкоманнан, а фракции III и IV — галактоглюкоманнан в смеси с другими полисахаридами. Выделенный из I и II фракций галактоглюкоманнан содержал Д-галактозу, 0-глюкозу и D-маннозу в соотношении 5 18 77. Содержание ацетильных групп в нем составляло около 6%. [c.47] Вернуться к основной статье