ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Регенерация хроматографических колонок, заполненных силикагелем из "Высокоэффективная жидкостная хроматография на микроколоночных хроматографах серии Милихром" Зависимость оптической плотности Л вещества от длины волны падающего на кювету с веществом света в диапазоне длин волн от 190 до 360 нм (1 нм = 10 м) называется ультрафиолетовым спектром поглощения (рис. 5.2). [c.53] Считается, что УФ-спектры сугубо индивидуальны для каждого вещества, однако УФ-спектры растворов слищком сглажены и имеют щирокие полосы поглощения, что делает эти спектры не слищком информативными. Тем не менее, получение УФ-спектров компонентов разделяемой смеси необходимо для определения оптимальной длины волны анализа, что позволяет значительно поднять порог обнаружения этого вещества. Для идентификации соединений чаще используют так называемые спектральные отношения (см. табл. 6.1). [c.53] Любое вещество, поглощающее в ультрафиолетовой части электромагнитного спектра, имеет длину волны, при которой вещество имеет максимальное поглощение. При использовании такой длины волны детектор имеет наименьший порог обнаружения (в граммах) вещества. [c.54] Спектрофотометрические детекторы имеют конструкцию, позволяющую изменять длину волны падающего света (рис. 5.3 и 5.4). [c.54] Сплощное ультрафиолетовое излучение от лампы ДДС-30 через оптическую систему поступает на дифракционную рещетку, где раскладывается на монохроматические лучи света. Поворачивая дифракционную решетку, мы направляем нужное нам излучение через щель монохроматора на зеркало модулятора. Зеркало модулятора непрерывно перебрасывает луч света то в рабочую кювету, формируя луч I, то в сравнительную кювету, формируя луч 1 . Эти лучи попеременно поступают на фотоэлектрический умножитель, затем - на логарифмический усилитель, где рассчитывается величина оптической плотности 1/1. [c.54] Предел детектирования разный для разных веществ и зависит от величины , которая, в свою очередь, зависит от строения исследуемого вещества. Например, для раствора антрацена в этаноле на длине волны 252 нм величина составляет 200000, а для раствора пиридина в гексане на длине волны 250 нм величина составляет 2000. [c.56] Таким образом, предел детектирования спектрофотометрического детектора для антрацена будет в 100 раз больше, чем для пиридина. [c.56] С помощью спектрофотометрического детектора (СФД) детектируется большое количество веществ различных классов, поглощающих ультрафиолетовый свет. СФД устойчив к изменениям внешней среды все это делает СФД самым распространенным детектором для ВЭЖХ. [c.56] При облучении некоторых веществ ультрафиолетовым светом возбужденные молекулы этого вещества, возвращаясь в исходное состояние, излучают собственное (вторичное или эмиссионное) излучение, сдвинутое в длинноволновую область по сравнению с возбуждающим Уф излучением. Если молекулы этого вещества находятся в возбужденном состоянии (при облучении одноразовым импульсом УФ-излучения) в течение 10 - Ю с, то такое эмиссионное излучение называется флуоресцентным, а описанное явление -флуоресценцией [1]. [c.56] Пусть монохроматическое ультрафиолетовое возбуждающее излучение от источника света интенсивностью падает на кювету К длиной 1. Кювета заполнена раствором вещества с концентрацией С. Вещество способно поглощать монохроматическое излучение, характеристикой способности к поглощению служит величина . Вещество испускает во все стороны от кюветы вторичное (флуоресцентное) излучение, сдвинутое по сравнению с возбуждающим излучением в длинноволновую область, интенсивностью Р (рис. 5.6). [c.56] С - молярная концентрация определяемого вещества. [c.57] Расчетная зависимость представлена на рис. 5.7 графиком экспериментальная - кривой б. [c.57] При достижении определенной оптической плотности (обычно около одной единицы оптической плотности для кюветы длиной 1 см), при повышении концентрации анализируемого соединения наблюдается самогашение флуоресценции. [c.58] На рис 5.8 представлена схема флуориметрического детектора хроматографа Милихром-5-7 . Ультрафиолетовое излучение от лампы ДДС-30 (1) через оптическую систему (2) попадает на дифракционную решетку (3). Поворотом дифракционной решетки нужное нам монохроматическое излучение направляется через щель монохроматора (4) на кювету (5), к которой присоединена хроматографическая колонка (6). Анализируемое флуоресцирующее вещество, попав в кювету, дает эмиссионное излучение, которое сферическим зеркалом (7) направляется через светофильтр (8), отрезающий ненужное излучение. Пройдя светофильтр, эмиссионное излучение регистрируется фотоэлектронным умножителем (9). Уф излучение, прошедшее через кювету, поглощается заглушкой (10). [c.58] Предел детектирования по ряду флуоресцирующих веществ может достигать 10 г. Природной флуоресценцией обладают полиядерные ароматические соединения, токсины органического происхождения, стероидные гормоны и ряд других соединений. Флуориметрический детектор широко применяется при анализе дансил-производных аминокислот. [c.59] ИЗОКРАТИЧЕСКИМ ЭЛЮИРОВАНИЕМ называется использование элюента постоянного состава в течение всего анализа. Почти все (кроме хроматограмм, в условиях которых есть термин градиент ) приведенные в монографии хроматограммы получены именно в этом режиме. Достоинством такого элюирования является техническая простота исполнения и высокая воспроизводимость времен удерживания, площадей и высот пиков. Для хроматографии на силикагельных колонках такой вид элюирования является единственно возможным из-за сложности регенерации колонки. [c.59] Одним из наиболее эффективных способов повьш1ения качества разделения смесей является ГРАДИЕНТНОЕ ЭЛЮИРОВАНИЕ. Смысл приема заключается в увеличении по определенному закону элюирующей силы элюента в процессе одного анализа. [c.59] В связи со сравнительно простой регенерацией, для проведения градиентного элюирования используются колонки, заполненные обращенно-фазовым адсорбентом. В этом случае увеличение элюирующей силы происходит за счет увеличения концентрации метанола или ацетонитрилз в элюенте в процессе одного анализа. Градиентное элюирование полезно в том случае, когда при использовании изократического элюирования невозможно добиться разделения всех компонентов, сильно различающихся по временам удерживания (рис. 5.9 и 5.10). [c.59] Регенерация колонки зависит от ее предыстории , т.е. от того, какую работу на этой колонке выполняли и к какой работе колонку необходимо подготовить. При анализе углеводородов, когда в качестве элюента использовался осушенный гексан, ухудшение разделения или воспроизводимости вызвано накоплением воды на адсорбенте. Регенерация достигается промывкой колонки осушенным гексаном в течение суток. Если свойства колонки не восстановились, ее необходимо заменить другой. Использованная колонка пригодна для проведения других анализов. При применении элюентов, содержащих органическую кислоту или амин, силикагель адсорбционно модифицируется, и использовать колонку для других анализов нежелательно попытки регенерации колонки к первоначальному состоянию дороги, длительны и не гарантируют успеха. [c.61] Вернуться к основной статье