ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Стафилококковая инфекция из "Медицинская и санитарная микробиология" При заболеваниях, вызванных стафилококками, исследуют гной, раневое отделяемое, пунктаты из полостей и абсцессов, материал со слизистых оболочек, кровь, мокроту, мочу, спинномозговую жидкость в случае пищевых отравлений — рвотные массы, испражнения больных, остатки пищи при профилактических исследованиях — смывы с инструментов и оборудования, стерилизованные материалы медицинского назначения, воздух. [c.104] При открытых гнойных поражениях материал берут ватным тампоном после удаления верхнего слоя гноя, в котором могут находиться непатогенные стафилококки и другие микроорганизмы, попавшие с кожи или из воздуха. При наличии закрытых гнойных очагов делают пункцию и выливают гной из шприца в стерильную пробирку. Отделяемое слизистой оболочки снимают сухим тампоном. Мочу, мокроту собирают в стерильные пробирки и банки. Кровь (5 — 20 мл), взятую шприцем из локтевой вены, и спинномозговую жидкость с соблюдением правил асептики сеют у постели больного во флакон, содержащий 100 — 200 мл сахарного бульона (pH 7,2 —7,4), или на среду для контроля стерильности. Стафилококки хорошо размножаются и на простых средах, однако лучше использовать обогащенные среды, так как септицемия может быть вызвана не только стафилококками, но и прихотливыми микроорганизмами (стрептококками, анаэробами и др.). [c.104] Бактериологическое исследование. В 1 -й день исследования петлей или шпателем материал засевают в чашки с 5%-м кровяным, а также желточно- или молочно-солевым агаром, которые инкубируют 18 — 24 ч при 37 °С и столько же на свету при комнатной температуре (для более четкого пигментирования колоний). Солевые среды ввиду высокого содержания хлорида натрия являются селективными для стафилококков, рост большинства сопутствующих микроорганизмов на них подавляется. [c.105] На 3-й день проверяют чистоту выделенной культуры, ставят тесты и делают посевы для ее идентификации (табл. 2.3). Обязательно определяют чувствительность штамма к антибиотикам, а при необходимости — фаговар (с использованием набора типовых стафилококковых бактериофагов). [c.105] На 4-й день проводят окончательную идентификацию культур по культурально-морфологическим, биохимическим тестам, чувствительности к антибиотикам и др. [c.105] От сходных по морфологии бактерий стафилококки дифференцируют по каталазному и бензидиновому тестам, устойчивости к бацитрацину (0,04 ЕД, диск), лизостафину (200 мкг/мл), эритромицину (0,4 мкг/мл) и фуразолидону (100 мкг, диск), а также другим тестам. [c.105] Для выявления плазмокоагулазы выделенную агаровую культуру в виде густой взвеси вносят в пробирку с 0,5 мл цитратной плазмы кролика и тщательно эмульгируют. Пробирки выдерживают в вертикальном положении при 37 °С и наблюдают за появлением коагуляции — свертывания плазмы (обычно положительный результат отмечается через 2 — 6 ч). [c.105] Для определения ДНКазной активности суточные культуры стафилококков засевают бляшками в чашку Петри с ДНК-содер-жаш,им агаром. [c.106] Через сутки в чашку вносят 5 мл 1 раствора соляной кислоты и через 3 — 5 мин наблюдают появление вокруг бляшек зоны просветления, свидетельствующей о наличии ДНКазы. [c.107] Определение фаговара культур имеет важное эпидемиологическое значение для выявления источника инфекции и путей заражения. Основной международный набор стафилококковых фагов состоит из 21 типа, разделенных на 4 группы. Наибольшее значение при внутрибольничных стафилококковых инфекциях имеют представители фаговаров 77 и 80. Вместе с тем довольно часто (до 40 % случаев) встречаются нетипируемые штаммы стафилококков. [c.107] Для выделения гемокультуры стафилококков посев крови в сахарном бульоне вьщерживают при 37 °С в течение 18 — 24 ч. Стафилококк вызывает равномерное помутнение среды. На 2-й день (или позже, в зависимости от темпов размножения) из бульонной культуры готовят и микроскопируют окрашенные по Граму мазки, затем пересевают ее на скошенный МПА и в чашку с кровяным агаром для выявления гемолитической активности. На 3-й день получают культуру на скошенном агаре и изучают так же, как культуру, выделенную из гноя или других материалов. [c.107] Для посева экссудата, гноя из невскрывшихся абсцессов, флегмон используют МПА или 5%-й кровяной агар, инкубируют при 37 °С в течение 18 — 24 ч, выделяют чистую культуру и проводят ее идентификацию вышеописанными методами. [c.107] При пищевых отравлениях исследуемый материал микроскопируют, затем сеют в чашки с МПА и в бульон, содержащий 1 % глюкозы (для обогащения). Материал, загрязненный сопутствующей микрофлорой, засевают на кровяной агар, содержащий 6 — 7 % хлорида натрия. На такой среде подавляется рост энтеробактерий и бацилл, а стафилококки растут хорошо и проявляют гемолитическую активность. Посевы инкубируют при 37 °С. На следующий день изучают колонии, выделяют и, далее, идентифицируют чистые культуры. Стафилококки, вызывающие пищевые отравления, образуют золотистый, реже белый пигмент, вызывают гемолиз и коагулируют плазму. [c.107] Для выявления продукции энтеротоксина культуру стафилококка засевают в специальную питательную среду. [c.107] На 1000 мл дистиллированной воды добавляют 20 г пептона, 1 г гидрофосфата натрия, 1 г гидрофосфата калия, 5 г хлорида натрия, 0,1 г хлорида кальция, 0,2 г хлорида магния, 0,8 агар-агара (pH 7,0—7,2). Стерилизуют 20 мин при 115 С. [c.108] Посевы помещают в атмосферу с 20 % Oj и инкубируют при 37 °С в течение 3 — 4 сут, а затем фильтруют через мембранные фильтры 3 и 4. Полученный фильтрат объемом 10 — 15 мл смешивают с равным количеством теплого молока и скармливают котятам в возрасте 1 —2 мес или же вводят фильтрат им в желудок с помощью зонда. При наличии энтеротоксина через 30 — 60 мин у котят возникает рвота — основной признак отравления, а через 2 — 3 ч появляется понос, продолжающийся в течение 2 — 3 дней, в тяжелых случаях возможен летальный исход. Фильтрат можно вводить котятам внутрибрюшинно, после прогревания его при температуре 100 °С в течение 30 мин (для инактивации термолабильных фракций токсина). В настоящее время токсигенность выделенных культур стафилококков определяют в опыте in vitro с помощью реакции диффузной преципитации в геле (см. подразд. 1.4.2). [c.108] Вернуться к основной статье