ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Инфекция, вызываемая из "Медицинская и санитарная микробиология" Материал для исследования гной, отделяемое ран, моча, спинномозговая жидкость, кровь, кал и др. Его берут по возможности до начала антибиотикотерапии или во время паузы между антимикробными воздействиями в соответствии с правилами асептики, не допуская контаминации. Если невозможно взять материал непосредственно из очага инфекции, исследованию подлежит отделяемое из очага (моча, мокрота и т.п.). [c.139] Бактериологическое исследование. В мазках из исследуемого материала обнаруживают прямые грамотрицательные палочки длиной 1—3 мм, расположенные беспорядочно, или короткими цепочками, часто в цитоплазме фагоцитов (в деформированном виде). В нативных препаратах псевдомонады подвижны. [c.139] Среда Олькеницкого и другие дифференциальные среды с глюкозой в столбике при росте синегнойной палочки не изменяется. Выделенную чистую культуру подвергают окончательной идентификации (см. табл. 2.8), проводят фаготипирование и обязательно определяют чувствительность к антибиотикам. Последнее необходимо, в частности, для правильного индивидуального подбора этиотропного лекарственного средства. [c.139] Тест окисления-ферментации глюкозы проводят в пробирках со средой Хью—Лейфсона столбиками, в одну из которых заливают вазелиновое масло. Пробирки выдерживают в термостате при 37 °С в течение четырех суток с ежедневным учетом результатов. Изменение цвета открытой среды с травянисто-зеленого на желтый свидетельствует об окислении глюкозы (см. цв. вклейку, рис. 9, а, б). Под вазелиновым маслом цвет среды не изменяется (синегнойная палочка относится к неферментирующим бактериям). [c.140] Выделение газа из нитрата калия определяют следующим образом культуру засевают в МПБ, содержащий 1 % нитрата калия и поплавок, заливают вазелиновым маслом. Посевы инкубируют 48 ч при 37 °С. При положительном результате отмечается помутнение и образование газа, в контроле без вазелинового масла — только помутнение. [c.140] Чувствительность к антибиотикам синегнойной палочки определяют строго в соответствии с унифицированным методом. [c.140] Через 18 — 24 ч инкубации при 37 °С изучают характер колоний на плотных средах (см. цв. вклейку, рис. 7, а). Эшерихии патогенных сероваров по культуральным свойствам и способности ферментировать лактозу не отличаются от банальных эшерихий, обитающих в кишечнике человека (за исключением лактозоотрицательных ЭИКП). Поэтому принадлежность выделенных микроорганизмов к патогенным группам вначале устанавливают по антигенной структуре с помощью РА. При этом отмечают на среде любые 10 лактозоположительных колоний и агглютинируют их на стекле смесью ОА -сывороток патогенных серогрупп . Смесь готовят таким образом, чтобы конечное разведение каждой сыворотки составляло 1 10. Отрицательная РА свидетельствует об отсутствии патогенных Е. соИ. [c.141] При росте на среде МакКонки с сорбитом ЭГКП образуют бесцветные колонии в отличие от других эшерихий, которые ферментируют этот углевод и образуют красные колонии. [c.141] Подозрительные колонии (при положительном результате РА — оставшуюся часть колонии) пересевают на комбинированную скошенную полиуглеводную среду (Рассела, Клигера и т.п.). [c.141] На 4-й день исследования проверяют чистоту культуры, определяют ее основные физиолого-биохимические свойства (засевают культуру на среды Гисса и другие дифференциальные среды) проводят серотипирование выделенной культуры путем постановки ориентировочной РА на стекле с поливалентной ОА -сьшороткой, а затем — развернутой РА с адсорбированными групповыми сыворотками для определения ОА -серогруппы. Дифференциальные биохимические признаки эшерихий представлены ниже (табл. 2.10). [c.144] Культуру, давшую развернутую РА с одной из сывороток, сеют на остальные дифференциальные среды для окончательной идентификации. [c.144] Большую диагностическую ценность имеет обнаружение у выделенных культур (или непосредственно в патологическом материале) факторов патогенности адгезинов, энтеротоксинов, цитотоксинов и др. Для этого иногда применяют методы иммуно- и генодиагностики (РА, ИФА, РП в геле, ДНК-зонды, ПЦР), а также экспериментальные модели (заражение культур ткани, лабораторных животных). [c.144] Адгезивность и инвазивность определяют на культурах тканей Нвр-2 или НеЬа (см. подразд. 1.3.4, 3.1). Для этого бульонную культуру бактерий в логарифмической фазе суспензируют в культуральной среде и в строго определенном количестве вносят в емкости с монослоем эукариотических клеток. Через 3 ч инкубирования при 37 °С в присутствии СО2 клетки ткани отмывают фосфатным буфером, фиксируют и окрашивают (для определения индекса адгезивности) или покрывают свежей культуральной средой, содержащей гентамицин (для уничтожения внеклеточно расположенных бактерий), и продолжают инкубировать в течение 1 ч, после чего многократно промывают монослой, фиксируют и окрашивают его клетки (для определения индекса инвазивности). Индексы вычисляют как среднее количество микробных клеток, взаимодействующих с одной эукариотической (при этом изучают не менее 100 эукариотических клеток в препарате). [c.144] Для ускоренной идентификации возбудителя в исследуемом материале применяют прямую или непрямую РИФ. В этом случае предварительный результат получают через 1 — 2 ч. Для быстрого отбора подозрительных колоний (например, Es heri hia oli 0157 HI на агаре с сорбитом), кроме агглютинирующих сывороток, используют латексные диагностикумы, покрытые соответствующими антителами (реакция латексной агглютинации). [c.145] Вернуться к основной статье