ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Разделение и качественный анализ аминокислот из "Руководство по ионообменной, распределительной и осадочной хроматографии" Распределительная хроматография может быть широко использована в качественном анализе катионов. [c.141] Особенно перспективно применение хроматографических методов при быстрых ориентировочных определениях катионов в малых количествах исследуемых образцов и для разделения химически близких элементов . [c.141] Бумага. Для качественного анализа неорганических веществ может быть использована бумага для хроматографии 1, 2, 3 и различные сорта фильтровальной бумаги ( 4, 5 и синяя лента , см. стр. 124). [c.142] Перед хроматографированием любую бумагу обрабатывают следующим образом погружают на 30 мин в 0,1 н. спиртовой раствор едкого натра. Затем бумагу отмывают от щелочи дистиллированной водой и помещают на 3—4 ч в 2%-ный раствор соляной кислоты, после чего полосы бумаги вынимают, промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Для извлечения оставшихся нежелательных примесей бумагу помещают в камеру для хроматографирования и однократно пропускают растворитель. Затем бумагу высушивают, после чего она годна к применению. [c.142] Проявители. Для идентификации неорганических веществ редко используют метод свидетелей . Чаще применяют реактивы, дающие различное окрашивание с хроматографируемыми ионами. Кроме того, при анализе хроматограмм неорганических веществ предварительно рассчитывают определяемых ионов и, сопоставляя их с 1 пятен на хроматограмме, делают заключение о присутствии тех или иных ионов в растворе (см. стр. 132). [c.142] В данной работе в качестве проявителей использованы растворы сульфида аммония, феррицианида калия, насыщенный спиртовой раствор рубеановодородной кислоты, спиртовой раствор диметил-глиоксима, насыщенный спиртовой раствор о-оксихинолина. [c.142] По данным нисходящей и восходящей хроматограмм рассчитывают катионов и решают, какой из способов получения хроматограммы наилучший. [c.142] Разделение Ре +-, Си -, Со - и Ni +-иoнoв методом круговой хроматографии. Для разделения берут раствор смеси хлоридов катионов Ре , Со , N1 (20—30 мг мл каждого катиона). Растворитель—ацетон, содержащий 20% соляной кислоты (пл. 1,19 г см ). [c.143] Форма применяемой бумаги для получения хроматограмм приведена на рис. 23 (см. стр. 116). [c.143] На хроматографическую бумагу на расстоянии 0,5 см от центра наносят по окружности 4—5 капель анализируемой смеси. К центру листа подводят растворитель. Развитие хроматограммы осуществляется до тех пор, пока растворитель не пройдет почти все расстояние, не доходя до края камеры на 0,5—0,7 см. Затем лист вынимают из камеры, высушивают и хроматограмму проявляют, погружая в раствор рубеановодородной кислоты и выдерживая в парах аммиака. Проявление можно осуществить и другим способом хроматограмму делят на ряд секторов и каждый сектор проявляют реактивом, характерным для того или иного катиона сульфидом аммония, ферроцианидом калия, диметилглиоксимом с аммиаком, рубеановодородной кислотой с аммиаком. Затем находят R для определяемых ионов. [c.143] После прохождения растворителя через весь лист (3—4 ч в зависимости от сорта бумаги) хроматограмму вынимают из камеры, высушивают и помещают в другую камеру, на дно которой налит бутанол, насыщенный 0,1 н. раствором соляной кислоты. [c.144] Растворитель пропускают в направлении, перпендикулярном первому (см. стр. 112). Через 2—3 ч хроматограммы извлекают из камеры, высушивают и проявляют насыщенным спиртовым раствором о-оксихинолина с последующей экспозицией в парах аммиака. В конечном итоге хроматограмма имеет вид, показанный на рис. 35. Для контроля положения зон, содержащих те или иные ионы, на хроматограмме проводят сопоставление цвета пятен хроматограммы с пятнами отдельных катионов при проявлении их о-оксихинолином и путем измерения каждого компонента отдельно и в смеси. [c.144] Применение распределительной хроматографии для изучения химии и обмена аминокислот и белков имеет наибольшее значение, так как с ее помощью удается разрешить труднейшие задачи разделения, идентификации и выделения индивидуальных аминокислот и пептидов из их смесей. В литературе описано много работ по хроматографическому разделению и определению аминокислот. [c.144] Для этого листы бумаги, соответствующие по размеру хроматографической камере, на 1—2 мин опускают в 0,1%-ный раствор о-оксихинолина. Этот раствор готовят растворением 0,1% (по массе) о-оксихинолина в смеси, состоящей из 4 частей н-бутилового спирта, 1 части ледяной уксусной кислоты, 1 части воды (по объему), затем бумагу подсушивают, помещают в хроматографическую камеру, один конец закрепляют в кювете, где содержится (без о-оксихинолина) смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты и воды (4 1 5), и растворитель пропускают по бумаге сверху вниз до полного удаления темноокрашенных соединений о-оксихинолина с катионами металлов, на что требуется 36— 48 ч. Промытую бумагу сушат на воздухе в вытяжном шкафу. [c.145] Бумагу можно также промыть 1%-ным раствором грилона Б. Для этого бумагу смачивают раствором трилона Б, переносят в хроматографическую камеру или кювету с двойным дном (верхнее—перфорированное, на которое кладут бумагу) и отводной трубкой для отсасывания воды и воздуха водоструйным насосом и промывают в течение нескольких часов дистиллированной водой. Отмытую бумагу высушивают на воздухе в течение нескольких часов. Следы трилона Б и о-оксихинолина могут помешать количественному определению аминокислот, поэтому отмывание следует проводить особенно тщательно. [c.145] Перед анализом аминокислот, аминов и белков бумагу подвергают также следующей обработке тщательно отмывают 0,3 н. раствором соляной кислоты, затем нейтрализуют кислоту 0,5 н. раствором NaOH, избыток щелочи отмывают дистиллированной водой до отрицательной реакции с фенолфталеином и в заключение обрабатывают 0,1%-ным фосфатным буферным раствором с pH 7,7—7,5 и высушивают. [c.145] Растворители и проявители. 1. Водонасыщенный 80%-ный раствор фенола готовят смешиванием 80 мл разогретого на водяной бане перегнанного фенола с 20 мл дистиллированной воды. Чтобы перегнанный фенол не окислялся при хранении и не темнел, перегонку ведут следующим образом. К 88 г расплавленного фенола добавляют 12 мл воды, 100 мг алюминиевых стружек и 50 мг NaH Og. Смесь помещают в колбу Вюрца и фенол перегоняют при атмосферном давлении. Собирают фракцию, кипящую при 185 °С. [c.145] При хранении последних двух растворителей возможно образование соответственно бутилацетата и формилацетата, поэтому их не следует хранить более одной недели. [c.146] В качестве проявителя аминокислот применяют 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне (200 мг перекристаллизованного нингидрина растворяют в 100 мл чистого ацетона). Хранят проявитель в темной склянке. [c.146] Вернуться к основной статье