ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Определение мочевины в крови уреазным методом по Конвею из "Руководство к практическим занятиям по биологической химии Издание 2" В крови, кроме белков, содержатся небелковые азотистые соединения, представляющие собой промежуточные и конечные продукты белкового обмена — мочевина, мочевая кислота, креатин, креатинин, полипептиды, аминокислоты, индикан, билирубин и др. [c.228] Общее содержание небелкового или остаточного азота крови, в среднем составляет 20—40 мг%, из них на долю азота мочевины падает от 10 до 20 мг%, т. е. 50% общего количества остаточного азота. [c.228] Содержание мочевины в крови здорового человека составляет от 20 до 40 мг. [c.229] Повышение содержания мочевины в крови обнаруживается при острых и хронических заболеваниях почек, сопровождающихся нарушением выведения мочевины из организма (нефриты, инфекционные заболевания, сердечная недостаточность и др.). [c.229] Определение содержания мочевины в крови имеет диагностическое значение и помогает следить за ходом патологического процесса. [c.229] Метод определения мочевины основан на том, что мочевину крови разлагают ферментом уреазой на аммиак и угольную кислоту, в результате чего образуется углекислый аммоний. [c.229] Реакцию производят в чашках Конвея. [c.229] Образовавшийся углекислый аммоний разлагают щелочью (в наружной камере) и выделяющийся аммиак улавливают (во внутренней камере) борной кислотой, к которой прибавлена смесь индикаторов . [c.229] При связывании борной кислоты аммиаком окраска жидкости меняется от розовой к зеленой. [c.229] По окончании реакции, жидкость во внутренней камере титруют из микро бюретки 0,004 н. раствором кислоты до исходной розовой окраски. [c.229] Количество 0,004 н. кислоты, пошедшее на титрование, соответствует количеству аммиака, вытесненного из соединения с борной кислотой, т. е. количеству аммиака, образовавшегося из мочевины под действием уреазы. [c.230] Ход работы. Во внешнюю камеру чашки Конвея (рис. 21) помешают 0,2 мл крови и 0,5 мл раствора уреазы (или 0,5 мл фосфатного буфера с pH 6,3—6,4 и полоску уреазной бумаги). [c.230] Во внутреннюю камеру вносят 2 мл раствора смесв борной кислоты с индикаторами. Чашку закрывают крышкой и оставляют на 15 минут при комнатной температуре. Крышка должна быть хорошо пришлифована и смазана смазкой. [c.230] Затем во внешнюю камеру прибавляют 1 мл насыщенного раствора карбоната калия (КгСОз) , плотно закрывают крышкой, перемешивают и оставляют на 1 /2—2 часа. [c.230] Выделяющийся аммиак поглощается во внутренней камере борной кислотой, что заметно по изменению окраски индикатора (от розовой к зеленой). [c.230] По истечении указанного срока, содержимое внутренней камеры титруют 0,004 н. раствором соляной кислоты до исходной розовой окраски. Количество 0,004 и. кислоты, пошедшей на титрование, эквивалентно количеству аммиака, вытесненного из соединения с борной кислотой, следовательно, эквивалентно количеству аммиака, образовавшегося из мочевины под действием уреазы. [c.230] например, на титрование пошло 0,72 мл 0,004 н. соляной кислоты, то в 0,2 мл крови содержится 0,12 лгХ 0,72 = 0,0864 мг мочевины, а в 100 в 500 раз больше 0,0864 мг X 500+43,2 мг. Следовательно, содержание мочевины в крови составляет 43,2 мг%. [c.231] Чашка Конвея представляет собой кристаллизатор, в центральной части которого впаяно стеклянное кольцо. Кольцо отделяет внешнюю камеру чашки от внутренней. Диаметр внешнего со суда равен 7—8 см, диаметр внутреннего сосуда равен 3—4 см. Высота внешнего сосуда равна 1,5 см, высота внутреннего сосуда равна 1,0 см. Чашка плотно закрывается хорошо пришлифованной к внешнему цилиндру стеклянной крышкой. Для получения герметичности шлиф смазывают специально приготовленной смазкой. [c.231] Удобнее работать с чашкой Конвея, в которой в наружной камере впаяны 2 перемычки, высотой 0,5 см, которые делят наружную камеру на 2 половины. В этом случае в одну половину наружной камеры помещают кровь и раствор уреазы, а во вторую — карбонат калия. Чашка плотно закрывается крышкой и через 15 минут содержимое двух отделений наружной камеры осторожно перемешивается (так, чтобы брызги из наружной камеры не попали во внутреннюю камеру, и чтобы не нарушилась герметичность крышки), и чашка в закрытом виде оставляется на П/2—2 часа. [c.231] Вернуться к основной статье