ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Активный центр из "Биохимия растений" Активным центром называют ту часть фермента, которая соединяется с субстратом. Вместе с Кошлендом [20] мы будем рассматривать активный центр как участок фермента, построенный из аминокислот, вступающих в контакт с субстратом, и вспомогательных аминокислот, которые также играют определенную роль в ферментативном действии. Для изучения активного центра предложено три основных метода. [c.67] Это общее решение, но часто интерес представляют два специальных случая. [c.68] Таким образом, максимальная скорость не изменяется в присутствии I, как показано на фиг. 17. [c.68] Таким образом, неконкурентный ингибитор снижает Умакс, но не изменяет кажущейся Км, как это показано на фиг. 18. [c.69] Неконкурентное подавление ферментативной реакции. [c.69] Конкурентное и неконкурентное подавление можно различить экспериментально, измеряя (в присутствии и в отсутствие ингибитора) влияние концентрации субстрата на скорость реакции. Необходимо помнить, что эти два вида подавления представляют собой крайние случаи обычно же результаты удовлетворяют некоторому промежуточному состоянию. Так, например, I может не соединяться с активным центром, но сродство между EI и S может отличаться от сродства В и S, так что а 1. Когда S и I конкурируют за данный активный центр, они могут присоединяться к Е в другом центре и влиять на сродство Е к I и (или) к S. Таким образом, соединение EIS не является запрещенным и, следовательно, а ф оо. [c.69] В основе этого метода лежит предположение Михаэлиса и Пехштейна [26], что колоколообразная кривая зависимости ферментативной активности от pH отражает ионизацию определенных групп в молекуле фермента. Во многих случаях зависимость константы Михаэлиса или максимума скорости от pH выражается кривой, похожей на кривую титрования. Расчеты (см. [10]) позволяют определить рК соответствуюш,ей группы, а иногда и предварительно идентифицировать ее (см. табл. 2). Зависимость максимума скорости от pH может быть иной, чем зависимость константы Михаэлиса от pH. В таких случаях можно полагать, что в связывании и разрушении фермент-субстратного комплекса участвуют разные группы. [c.70] Основной успех в изучении активных центров был достигнут тогда, когда установили, что нервный газ диизоиропилфторфосфат (ДФФ) стехиометрически реагирует с некоторыми ферментами, образуя устойчивый фосфорилированный фермент [3]. [c.70] Вернуться к основной статье