ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Методы выделения и разделения из "Биохимия фенольных соединений" При выборе метода выделения фенола, встречающегося в природе, необходимо учитывать не только свойства соединения, как упоминалось выше, но также и химический состав биологического источника. Растительный материал состоит в основном из нерастворимой целлюлозы и лигнина, а в свежем виде может содержать также большое количество (70—80%) воды. Кроме того, могут присутствовать хлорофилл, воски, жиры, терпены, сложные эфиры, растворимые в воде соли, гемицеллюлозы, сахара и аминокислоты. Из свежего или сухого материала, как правило, сначала выделяют с помощью неполярного органического растворителя (например, петролейного эфира, гексана, бензола, хлороформа или эфира) нефенольные, неполярные вещества. Фенольные соединения можно затем выделить путем экстракции ацетоном, этанолом, метанолом или водой, причем выбор растворителя определяется числом гидроксильных групп и остатков сахара в молекуле. В некоторых случаях растительные материалы подвергаются непосредственной экстракции щелочью, но это не всегда приводит к хорошим результатам. Фенолы из растительного материала затем очищаются путем ряда экстракций и осаждений. С этой целью сырой материал переносят в несмешивающийся растворитель, такой, как эфир, бутанол или этилацетат, и смесь последовательно экстрагируют разбавленными растворами оснований в порядке возрастания активности сначала ацетатом натрия (для удаления сильных кислот), а затем бикарбонатом натрия, карбонатом натрия и едким натром. Водные экстракты, содержащие искомые продукты, подкисляют и вновь экстрагируют бутанолом, эфиром или этилаце-татом. Процедуру повторяют до получения кристаллического продукта. Подобное фракционирование в настоящее время осуществляется путем автоматической подачи несмешивающихся растворителей по принципу противотока (Хёрхаммер и Вагнер [9]). Фенолы можно отделять от других продуктов, содержащихся в растениях, путем осаждения с помощью нейтрального или основного ацетата свинца. Этим методом до некоторой степени отделяются о-диоксисоединения (дают осадок) от монозамещенных соединений (не дают осадка). Соли свинца разлагают серной кислотой, сероводородом или катионообменными смолами и свободные с )енолы элюируют из неорганических солей спиртом. [c.36] В настоящее время бумажная хроматография является основным методом разделения сложных смесей природных продуктов на их составляющие и широко применяется для разделения фенольных соединений. [c.37] Во многих учебниках [12, 13, 14] подробно рассматриваются различные методы препаративной бумажной хроматографии одномерной, двумерной и противоточной. [c.37] В табл. 1 приведен перечень наиболее часто используемых проявителей для фенолов. Выбор растворителя и точные пропорции компонентов определяются конкретной смесью, подлежащей разделению. Широкое применение смеси бутанол — уксусная кислота — вода (БУкВ) объясняется ее прекрасной разделяющей способностью. После проявления хроматограммы окрашенные фенольные соединения (антоцианы и хиноны) отчетливо различаются на бумаге без дальнейшей обработки. [c.37] Большинство фенольных соединений обнаруживаются в ультрафиолетовом свете либо по их окраске и яркой флуоресценции, либо по темно-пурпурному цвету, появляющемуся вследствие поглощения света. Некоторые фенолы обнаруживаются только после обработки хроматограммы опрыскиванием. В табл. 2 приведен перечень наиболее эффективных смесей для опрыскивания. [c.37] При опрыскивании смесью хлорное железо — феррицианид обнаруживаются фенольные соединения всех типов, но эта смесь менее эффективна для идентификации, чем растворы солей диазония. Некоторые реагенты можно использовать для обнаружения специфических групп в молекуле например, с помощью реагента Бенедикта можно различать соединения, содержащие о-диоксигруппы, и соединения, имеющие одну гидроксильную группу (Резник и Эггер [15]). [c.37] Новый быстро развивающийся метод хроматографии в тонком слое (Сталь [16]) пока не нашел широкого применения для разделения смесей фенолов. По-видимому, этот метод может оказаться чрезвычайно полезным при изучении фенольных метаболитов в моче, так как считают, что загрязнение неорганическими солями не влияет на величину Rf, поэтому мочу можно хроматографировать непосредственно (Диамантштейн и Эрхарт [17]). [c.37] Воду добавляют по каплям до полного насыщения. [c.39] Желтое окрашивание с кислотой или основанием. [c.44] Сравнительно полный перечень фенолов, выделенных из растений, см, Каррер [26]-Другие признаки упоминаются в тексте — в общем и специальном разделах. [c.50] 2%-ный раствор 2,4-динитрофенилгидразина в 2 н. НС1. [c.50] Свойственно всем аминофенолам. [c.50] Заслуживающие внимания методы газовой хроматографии и бумажного электрофореза (Блок и сотр. [12]) применяют только к одному или двум классам фенольных соединений. Электрофорез обычно проводят в присутствии молибденовых и боратных буферов. В работе Придхама [18] иллюстрируются, возможности метода. [c.51] Вернуться к основной статье