ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Количественная хроматография в тонком слое с использованием денситометрии из "Справочник по физико-химическим методам исследования объектов окружающей среды" При использовании денситометрического метода интенсивность окраски вещества в зоне измеряется непосредственно на хроматограмме. Рассмотрим две серии параметров, влияющих на точность и воспроизводимость результатов. [c.276] Параметры, связанные с эксплуатацией прибора. Определение основано на том, что окрашенное пятно сканируется с помощью луча света и некоторая часть лучистой энергии поглощается, приче.м количество поглощенной энергии обусловлено интенсивностью окраски. Последняя оценивается по разности, т. е. путем возвращения непоглощенного света на фотоумножитель, который измеряет интенсивность падающего пучка света, или на второй фотоумножитель, находящийся в балансе с первым. Разность интенсивности падающего и отраженного или проходящего света регистрируется кривой на диаграмме или интегратором. При этом существует определенное соотношение между площадью пика, показаниями интегратора и количеством вещества в пятне. [c.276] Оптическая система прибора сконструирована так, что если существует равновесие между контрольным пучком света и свето.м, отраженным от адсорбента, то перо самописца проводит непрерывную прямую линпю и интегратор не считает. Если свет поглощается окрашенным пятном, то перо описывает кривую, пик которой соответствует максимуму поглощения. В то же время интегратор считает, причем скорость счета увеличивается по мере удаления пера от линии уровня фона. [c.276] Если граница окрашенного пятна четко выражена и цвет адсорбента между смежныдщ пятнами белый, перо возвращается к линии уровня фона и интегратор перестает считать. [c.276] Площадь пика при этом должна быть связана линейной зависимостью с показателем интегратора. [c.276] Вследствие того что вещество окращено, оно будет поглощать свет преимущественно дополнительных цветов, а так как в качестве источников св та применяют в основном лампы с вольфрамовой нитью, излучающие свет в широком диапазоне длин волн, необходимо использовать подходящие фильтры для контроля длин волн падающего света. Поэтому должна учитываться окраска пятна и самого адсорбента. Как правило, хро.матографически разделенные вещества имеют различные окраски, и аналитик может подобрать подходящий фильтр. [c.277] Применяются два метода сканирования пятен в отраженном и в проходящем свете. В отношении выбора того или иного метода нельзя дать никаких рекомендаций, вопрос решается экспериментально. [c.277] При методе пропускания поглощается больше лучей, чем при методе страже ния, так как пучок света, проходя через сплошной слой, контактирует с более окрашенным веществом, чем в случае отражения от поверхности. При методе пропускания будет рассеиваться большее количество лучей, поэтому с целью уменьшения этого рассеивания адсорбент пытаются превратить в непрозрачный материал, обрабатывая его жидким парафином. Все же количество рассеянного, света при сканировании неизвестно и зависит от факторов, не связанных с конструкцией прибора. [c.277] Затем сравнивались между собой пятикратное нанесение по 2 мкл раствора с концентрацией X в виде точек в одно место и однократное нанесенпс 3 мкл раствора того же вещества, но с концентрацией 5Х. Он сделал вывод, что колебание результатов из-за недостаточной точности первоначального нанесения больше, чем колебание, обусловленное дснситометрией. [c.278] Техника нанесения раствора на поверхность адсорбента, описанная в работе [66], предохраняет его поверхность от повреждения, и начальное пятно имеет при этом круглую форму. Диаметр пятен в точках на линии старта будет изменяться в зависимости от количества наносимого вещества, причем при малых загрузках (до 40 мкг) площади пиков, полученные из начальных пятен с достаточно близкими диаметрами, сильно различаются, а при больших нагрузках (свыще 40 мкг) слабо. При этом результаты, полученные методами отражения и пропускания, почти одинаковы. Следует учитывать, что при использовании различных растворителей одинаковому количеству одного и того же вещества после отделения с помощью хроматографии в тонком слое соответствуют разные показания денситометра. [c.278] Для одной системы растворителей могут так.же изменяться значения Rf. В работах [23, 32] обсуждались многие факторы, влияющие на воспроизводимость значений Rf. [c.278] Даллас утверждает, что площадь пика прн Rf = onst зависит от скорости протекания растворителя чем выше скорость потока, тем больше площадь пика. Это сильнее проявляется при высоких значениях Rf. Влияние времени контакта вещества с растворителем на площадь пика оказалось незначительным. Этот же исследователь показал, что площадь пика зависит от толщины слоя, причем при методе отражения площадь пика уменьшается, а при методе пропускания возрастает с увеличением толщины слоя. На конечные значения Rf существенно влияет степень влажности адсорбента. Поэтому необходимо использовать всегда только пластинки с тонким слоем сорбента, которые хранятся в условиях тщательно контролируемой влажности после нанесения слоя, так как адсорбенты быстро поглощают влагу в зависимости от относительной влажности и температуры. [c.278] Даллас сканировал одно пятно 5 раз по методу отрал ения, передвигая пластину и возвращая се в прежнее положение после каждого сканирования. Записанная площадь пика была измерена 10 раз планиметрически, было найдено процентное отклонение для 50 показаний прибора — 1,73. [c.278] Стандартное же процентное отклонение интегратора при сканировании пятен, содержащих различные количества вещества, составляло 2,08, т. с. в этих условиях существует линейное соотношение между показаниями интегратора и площадью пика. [c.278] Однако на практике подобное наблюдается редко, потому что слой адсорбента между пятнами не всегда свободен от поглощающих веществ, в результате чего перо не всегда возвращается к первоначальной линии уровня фона, а создает новую, более высоко расположенную линию. Часто это можно преодолеть сканированием в направлении, перпендикулярном к развитию хроматограммы. [c.279] Эти же авторы советуют вести определение среднего значения по возможности из меньшого количества показаний прибора с одной пластинки, т. е. с учетом различия между двумя пластинками (влажность, толщина слоя и т. п.). [c.279] Вернуться к основной статье