ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Нуклеотидный состав и обнаружение идентичных последовательностей в полинуклеотидах из "Органическая химия нуклеиновых кислот" Одной из важных характеристик различных типов нуклеиновых кислот является состав входящих в них компонентов. Результаты многочисленных анализов состава нуклеиновых кислот, проведенных в конце сороковых — начале пятидесятых годов, послужили решающим аргументом, позволившим отбросить старое представление о нуклеиновых кислотах как тетрануклеотидах или полимерах, содержащих повторяющиеся тетрануклеотидные последовательности. Эти данные подготовили почву для создания современных представлений о макромолекулярной структуре ДНК. [c.58] Значительно большей деградации могут подвергаться некоторые редкие компоненты нуклеиновых кислот. Дигидроуридин, например, разрушается в обычных условиях щелочного гидролиза РНК (см. стр. 456). [c.59] Вследствие этого в современных исследованиях предпочитают проводить анализ нуклеотидного состава с помощью ферментативного расщепления полимеров. [c.59] Для определения нуклеотидного состава ДНК использовались и исследования физических характеристик двухцепочечных комплексов. Показано, что существует хорошая корреляция между температурой плавления или плавучей плотностью 2 таких комплексов и их нуклеотидным составом. [c.59] Смысл правила Чаргаффа для ДНК стал понятным после выдвижения Уотсоном и Криком своей модели структуры ДНК эквивалентно содержание тех пар оснований, которые являются комплементарными при образовании двухцепочечцого комплекса. Состав одноцепочечных ДНК, например ДНК фага ФХ174, не подчиняется правилам Чаргаффа. [c.60] Состав двухцепочечных комплексов вирусной РНК также подчиняется правилу Чаргаффа для ДНК (с заменой тимина на урацил), РНК реовируса и вируса тканевой опухоли ран растений имеют соответственно 44 и 38% гуанина + цитозина. Для остальных видов РНК обычно не наблюдается эквивалентности между содержанием комплементарных оснований. [c.60] Содержание РНК данного вида в клетке. [c.61] Естественно, что одинаковый состав двух полинуклеотидов не означает даже при одинаковом молекулярном весе их идентичности в химическом смысле они могут отличаться последовательностью нуклеотидов. Поскольку установление последовательности (см. следующий раздел) является сложной и не до конца разрешенной проблемой, были разработаны методы приближенной оценки соответствия различных полинуклеотидов по нуклеотидной последовательности. Эти методы широко применяются в биохимических исследованиях. [c.61] Нагревание полинуклеотида LII при температуре несколько ниже температуры плавления и последующее медленное охлаждение приводит к образованию циклической структуры LIII за счет нековалентного взаимодействия комплементарных липких концов . Такая структура может быть обнаружена с помощью электронной микроскопии. Этот прием был использован для доказательства того, что концевые участки полинуклеотидных цепей ДНК фагов ТЗ и Т7 имеют одинаковую последовательность. Пользуясь сочетанием гибридизации и циклизации , можно различить вирусные ДНК, содержащие уникальную последовательность нуклеотидов и представляющие набор циклически переставленных фрагментов 74 (см. стр. 32). [c.63] Другой метод идентификации полимеров, применимый к исследованию полимеров с близкой нуклеотидной последовательностью, — анализ ближайших соседей 275-2 7 Применение его возможно в том случае, когда исследуемый полинуклеотид может быть получен из радиоактивных предшественников . [c.63] Повторив анализ для всех входящих в полимер нуклеозид-5 -трифосфатов, моисно определить содержание всех возможных сочетаний динуклеотидов в данном полимере это позволяет обнаружить идентичность или неидентичность двух нуклеотидных последовательностей. Такой метод широко применяется для исследования полинуклеотидов, получаемых с помощью ферментов in vitro. [c.64] Вернуться к основной статье