ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Фотосинтез сахаров из "Руководство к практическим занятиям по радиохимии" Оборудование и посуда. Счетная установка с торцовым счетчиком. Прибор для фотосинтеза (рис. 16.5). Прибор Сокслетта. Центрифуга. Хроматографические колонки. Лампа дневного света. Чашки Петри. Воронка для фильтрования. Бюретка. Колба на 5—10 мл. Хроматографический цилиндр. Газометр. [c.528] Растительный материал в виде дисков, приготовленных из листьев душистого табака (возраст 3—4 месяца), помещают в плоскую чашку на поверхность воды устьицами вверх. Чашку переносят в вакуум-эксикатор, соединенный с водоструйным насосом, ртутным манометром и колбой для получения СОг(рис. 16.5). [c.528] Прикапывая серную кислоту к Ва СОз, наполняют вакуум-эксикатор СОг. Прибор для получения СОг промывают воздухом и отключают, когда давление достигнет почти атмосферного (730—740 мм рт. ст.). Вакуум-эксикатор отъединяют от манометра и оставляют под лампой дневного света до следующего дня. [c.528] Затем попеременно откачивая газ из эксикатора и напуская азот, освобождают эксикатор от газообразного СОг. Полноту уда-ления СОг контролируют путем пропускания прошедшего эксикатор азота через барботер 4, наполненный баритовой водой. Вынимают растительные диски и фиксируют их пятиминутным кипячением в 96%-ном этиловом спирте. [c.529] Переносят диски в прибор Сокслетта и экстрагируют 80%-ным этиловым спиртом в течение 2 ч (до полного обесцвечивания дисков). Спиртовой раствор упаривают в вакууме досуха, осадок переносят на фильтр и несколько раз промывают небольшими порциями воды. В фильтрат вносят небольшое количество 1 %-ной серной кислоты и гидролизуют на кипящей водяной бане при перемешивании в течение 30 мин (идет расщепление сахаров на гексозы). Кислый раствор нейтрализуют горячим раствором МаОН (по бромфенолу синему рН = 3,0- 4,6) при перемешивании. По исчезновении желтой окраски нейтрализацию заканчивают. Осадок отделяют центрифугированием, промывают 2—3 раза небольшими порциями дистиллированной воды и отбрасывают. К раствору (100—150 мл) из бюретки добавляют 10%-ный раствор ацетата свинца до полного осаждения белков. Раствор подогревают и фильтруют. В фильтрат вносят 0,5 г активированного угля и раствор при постоянном перемешивании кипятят 10—15 мин. Уголь отфильтровывают, промывают дистиллированной водой и отбрасывают. Фильтрат упаривают до 30—50 мл и пропускают через колонки с катионитом (10 г) и анионитом (10 г) со скоростью 2 мл мин. [c.529] Чистоту выделенного продукта проверяют методом хроматографии на бумаге. Для этого на лист хроматографической бумаги размером 25X400 мм, отступя 30 мм от нижнего конца, наносят с помощью микропипетки 0,01—0,015 мл 0,5—1%-ного раствора выделенной глюкозы в 50—80%-ном этиловом спирте. Размер пятна не должен превышать 1 см в диаметре. Пятно подсушивают теплым воздухом и хроматограмму помещают в герметичный стеклянный цилиндр с растворителем (н-бутанол—уксусная кислота — вода в соотношении 4 1 5 берут верхний насыщенный слой). [c.529] Вернуться к основной статье