ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Частичный гидролиз полисахаридов и установление последовательности расположения моносахаридных остатков из "Химия и биохимия углеводов" Наиболее часто здесь применяются методы метилирования и периодатного окисления, причем результаты одного метода сопоставляют с данными другого. [c.67] Контроль полноты метилирования, имеющий огромное значение для избежания серьезных ошибок в отношении заключений о строении полисахарида, осуществляется либо аналитически (например, определением метоксилов микрометодом по Цейзелю), либо методом ИК-спектроскопии (по отсутствию поглощения свободных гидроксильных групп). [c.68] Применяются и другие методы, в частности комбинированный метод, при котором расщепление начинают муравьиной кислотой (постепенно повышая температуру ступенеобразно от 20 до ЮО°С) и заканчивают гидролиз 2 н. Ня504. [c.69] Необходимо помнить, что расщепление гликозидных связей метилированного полисахарида может сопровождаться частичным демити-лированием и разрушением продуктов гидролиза под влиянием щелочной среды. Это заставляет стремиться к наиболее щадящим методам гидролиза и искать более совершенные методы. [c.69] Анализ гидролизатов метилированных полисахаридов обычно труднее, чем при исследовании метилированных олигосахаридов. В последнем случае при небольшом числе моносазГаридных звеньев в молекуле содержание каждого метилированного компонента бывает достаточно большим. В смеси метилированных сахаров из полисахаридов содержание некоторых компонентов может быть очень малым (например, метилированной концевой группы при длинной линейной цепи). Поэтому здесь требования к точности анализа должны быть весьма большими. [c.69] Ранее упоминалось, что применение лишь хроматографических методов для анализа свободных сахаров в гидролизатах полисахаридов. недостаточно, необходимы препаративное выделение компонентов и их идентификация. То же относится и к анализу смесей метилированных сахаров. При препаративном разделении метилированных моносахаридов также пользуются хроматографическими методами, используя в качестве сорбентов целлюлозу, уголь и силикагель. Завершают очистку препаративной хроматографией на бумаге (картон, блоки из бумаги). [c.69] Интерпретация результатов метода метилирования. Основы оценки результатов метода метилирования уже были изложены в разделе Олигосахариды . Здесь мы рассмотрим лишь простейшие случаи интерпретации результатов метилирования линейного и ветвистого полисахарида. [c.69] Других метилированных сахаров, например, имеющих 3 свободных спиртовых гидроксила (которые могли бы образоваться из точек ветвления), анализ не обнаруживает, т. е. амилоза согласно приведенным данным является линейным полисахаридом . [c.70] Очевидно, 2,3-диметилглюкоза связана тремя своими гидроксилами у С-1, С-4 и С-6 с тремя глюкозными остатками, т. е. в амилопектине имеются 1,4 - и 1,6 -свя зи. Возможность 1,5-связей (при фуранозной структуре) должна быть отвергнута по причинам, рассмотренным при обсуждении строения амилозы. [c.71] Здесь более короткая цепь с концевой неальдегидной группой присоединена приблизительно в середине полигликозидной цепи со связями 1- 4. Нетрудно убедиться, что обе структуры должны дать одинаковые выходы ДИ-, три- и тетраметилглюкозы. [c.71] О недостатках метода метилирования уже говорилось в разделе Олигосахариды . Здесь необходимо прибавить, что этот метод дает менее четки результаты при наличии неуглеводных заместителей. Так например, при метилировании сульфатированных полисахаридов происходит деструкция моносахаридных звеньев. [c.72] Метод периодатного окисления играет в химии полисахаридов исключительно важную роль. В частности он позволяет проверить результаты, вытекающие из данных метилирования (и наоборот). Необходимо указать, что по технике метод периодатного окисления очень прост и требует для проведения исследований небольшого количества изучаемого вещества. Принцип метода описан ранее в разделе Олигосахариды . [c.72] Полученный раствор разбавляют водой, чтобы концентрация перйодата была не выше 0,05М. Концентрация полисахарида не должна превышать1%. Окисление должно идти в темноте при 5°С во избежание сверхокисления (см. ниже). Параллельно проводится холостой опыт. Через различные промежутки времени отбирают пробы для определения расхода перйодата и количества образовавшейся муравьиной кислоты. [c.73] Иногда при неправильной постановке опыта сверхокисление начинается сразу же после окончания основного процесса или даже до его окончания. Некоторые полисахариды иного строения дают сверхокисление, и тогда определение концевых групп этим методом проводить нельзя. [c.74] Окисление идет и далее, что приводит к дальнейшему образованию НСООН и СО2. Рассмотренные процессы, требующие дополнительного количества перйодата, лежат в основе так называемого процесса сверхокисления. Точное соблюдение условий предохраняет от быстрого наступления сверхокисления. С другой стороны, метод Хафа с определением формальдегида применяется в, некоторых случаях для изучения строения полисахаридов ([5], с. 478). [c.74] Описанные определения и расчеты очень часто применяются для сравнения глюканов типа амилозы — гликогена. [c.75] Изучение по л и а льдег идо в — продуктов периодатного окисления — дает наибольшую информацию о строении полисахаридов. [c.75] В последние годы очень широкое применение получила новая модификация метода периодатного окисления, предложенная Смитом ( деградация по Смиту ), заключающаяся в борогидридном восстановлении полиальдегидов (продуктов периодатного окисления), гидролиза полигидроксильных производных и исследовании образовавшихся соединений. [c.75] Вернуться к основной статье