ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Артеменко Е. Н., Чканикоё Д. И., Макеев А. М. Спектрофлуорометрическое определение индолилуксусной кислоты из "Методы определения фитигомонов, ингибиторов роста, дефолиантов и гербицидов" Свободная ИУК и ее производные не были обнаружены в листьях яблони [1]. О присутствии ИУК в плодах яблони и трудностях при )азделении и очистке экстракта есть сведения в работе Барген. 2, 3]. [c.24] Вопрос о присутствии ИУК в проростках кукурузы также до конца не ясен и решается исследователями часто одинаково как положительно [4, 5], так и отрицательно [6—8]. [c.24] Целью данной работы явилась разработка методики очистки экстракта из большой навески растительного материала с тем, чтобы доказать присутствие ИУК в изучаемых объектах — листья яблони и проростки кукурузы. [c.24] Материал и методы. Объектами исследования служили листья с двухлетних плодовых побегов яблони Грушовка московская на разных стадиях развития и 10-дневные этиолированные проростки кукурузы Буковинская 3. Собранный материал замораживали в сухой углекислоте и подвергали лиофилизации. В случае, если работу проводили на свежем материале, последний размельчали в жидком азоте и затем экстрагировали. [c.25] Вместо фильтра В-2 можно использовать фильтр Шотта с отрезанным верхом. [c.25] Конечный экстракт листьев яблони представлял 40—50 г чернозеленой смолистой массы. Предварительно были испытаны многие общепринятые приемы очистки фракционирование, очистка ацетонитрилом, толуолом, а также освобождение от фенолов с помощью поливинилпирроллидона. Однако все они оказались неприемлемыми для нашего случая. Нас не удовлетворял либо процент восстановления ИУК, либо объем работы и длительность операции. [c.26] Исходя из обстоятельства, что при хроматографии и элюции на пластинках со слоем силикагеля ИУК восстанавливается в 2 раза меньше, чем при хроматографировании на бумаге [10, 11] (см. таблицу), следующей очистительной ступенью было разделение объединенных фракций с силикагелевой колонки на бумаге Ватман 3 ММ с использованием растворителя изопропанол — аммиак — вода (ИАВ) (10 1 1). Хроматографию проводили в темноте при 1—2°. Зону ИУК со значением Щ 0,3 элюировали метанолом и вторично перехроматографировали в растворе 3%-ного NH4 I. [c.27] Для газохроматографического определения свободной ЙУК быЛ использован газовый хроматограф марки Цвет модели 1-64 с пламенно-ионизационным детектором. Методика газохроматографического анализа ИУК заключается в следующем капиллярные колонки из нержавеющей стали (0,096 X 100 см) наполняли сорбентом — силиконовый эластомер — 8Е-301 7% на хромосорбе W (фракции 80—100 меш). Газоноситель — азот, скорость потока 10 см 1сек, делитель потока — 1 200, температура колонки — 210°, а испарителя — 260°. Время выхода метчика метилового эфира ИУК 3,45 мин. [c.28] Перед газохроматографическим анализом элюаты зон ИУК с хроматограмм метилировали. Метанолиз осуществляли либо в присутствии ацетилхлорода в течение 30 мин., либо диазометаном. Метанол затем выпаривали под вакуумом, а остаток переносили гексаном в маленькую пробирку, после чего гексан удаляли под вакуумом, и остаток растворяли в 0,1 мл абсолютного ацетона. 5 мкл этого раствора (что соответствовало 2,5 г растительного образца) вводили в газовый хроматограф. [c.28] Общая схема выделения свободной ИУК из листьев яблони и проростков кукурузы представлена на стр. 29. [c.28] Указанным методом ИУК была выделена из проростков кукурузы. Идентичность ее с синтетической ИУК доказана сходством поведения при хроматографировании на бумаге и МТСХ в ряде систем растворителей и с помощью реакций со специфическими реактивами. Спектр поглощения вещества из кукурузы подобен спектру ИУК. Максимум поглощения — 283 и 290 мм. Методом ГЖХ также получено совпадение времени удержания ИУК и вещества из экст р акта кукур узы [16]. [c.28] Следовательно, способом, описанным в этой работе, была выделена свободная ИУК из этиолированных проростков кукурузы. Однако свободную ИУК не удалось обнаружить в листьях яблони плодоносящих и неплодоносящих деревьев сорта Грушовка московская в период дифференциации цветочных почек. Мы считаем возможным предполагать, что в тканях листьев яблони ИУК находится в трудно диссоциированном комплексе с какими-то веществами. Имеются также данные о разрушении ИУК тканями листьев яблони в процессе экстракции [17]. [c.29] При изучении физиологии роста растений в некоторых случаях целесообразно вести учет количества не только свободной ИУК, т. е. той, которая непосредственно извлекается из материала органическими растворителями — серным эфиром, метанолом и другими, но и связанной, которая освобождается только при гидролизе белка или других соединений, имеющих связь с нею. [c.30] Количество редуцированного серебра излучением Р-частиц из распадающегося О условно отражает количество ИУК-С . Подсчет числа зерен редуцированного серебра проводят световым микроскопом с иммерсионным объективом. Количество зерен и их распределение в клетке отражают интенсивность связывания ИУК в различных частях клетки (рис. 1). [c.32] Определение общего количества ИУК, связанной с белками. Свежесобранный материал (проростки, листья и стебли злаковых растений, гипокотили фасоли, стебли и корни бобов и других растений) в количестве 300—1000 г фиксируют и подвергают анализу на содержание ИУК. [c.32] Вернуться к основной статье