ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Физико-химические основы очистки и фракционирования ферментов Фракционирование белков из "Физико химические основы производства ферментных препаратов" Очистка и фракционирование биологически активных веществ основаны на методах, широко применяемых в физико-химии полимеров и химии белковых веществ. [c.59] После экстрагирования ферментов из культур плесневых грибов, выращенных поверхностным способом, или после культивирования микроорганизмов глубинным методом раствор ферментов или культуральную жидкость предварительно подвергают очистке. [c.59] Очистка некоторых ферментов может происходить и в процессе фракционирования данного комплекса ферментов, так как некоторые примеси могут перейти в водный раствор органической жидкости, применяемой для дробного осаждения ферментов. [c.59] Кратко рассмотрим современные методы очистки и фракционирования белков. [c.59] Одним из широко применяемых методов фракционирования белков является высаливание нейтральными солями. Впервые этим способом были отделены глобулины от альбуминов. Глобулины осаждаются при 50%-ном насыщении сернокислым аммонием, а альбумины — при более высокой концентрации. Сульфат натрия, обладая меньшей растворимостью, чем сернокислый аммоний, осаждает только глобулины. [c.59] Выявлено, что ионы, обладающие одинаковой валентностью, вызывают равный эффект высаливания, а высаливающее действие различных ионов пропорционально квадрату их валентности или величине, называемой ионной силой. [c.59] При определении ионной силы раствора суммируются все ионы. [c.60] Таким образом, ионная сила раствора соли с двумя одновалентными ионами (например, раствор хлористого натрия) равна ее молярности, умноженной на коэффициент, равный 1. [c.60] Следовательно, для солей, у которых один двухвалентный ион и два одновалентных (Mg l2), коэффициент равен 3, а для солей, образованных двумя двухвалентными ионами, коэффициент равен 4, т. е. ионная сила соответственно равна молярной концентрации соли, умноженной в первом случае на 3, во втором — на 4. [c.60] Ионная сила раствора имеет большое значение при растворении и выделении белков, их очистке, фракционировании и электрохимических исследованиях (электрофорез, определение изоэлектрической точки). [c.60] Для получения ферментных препаратов экстракт ферментов до или после фракционирования пропускают через иониты, сорбирующие пигдмептные вещества вытяжки или культуральной жидкости. [c.61] катионит СДВ-3 (получаемый сополимеризацией стирола с дивинилбензолом с последующим сульфированием серной кислотой) в Na-форме полностью обесцвечивает ферментный раствор, не вызывая инактивации амилолитических ферментов. [c.61] Обесцвечивание ферментных растворов этими ионитами происходит также успешно и в статических условиях. [c.61] Фракционирование проводилось осаждением ферментов органическими растворителями. Исследованиями показано, что при 53—56%-ной концентрации этилового спирта в растворе осаждается до 95% протеазы и только 7,5% амилазы. [c.61] Полное осаждение амилазы из раствора происходит в том случае, если концентрация этилового спирта в растворе достигает 70%. [c.61] Установлена также зависимость растворимости амилазы от pH раствора. Наименьшая растворимость, т. е. максимум осаждения, обнаруживается при pH 5,5—6,4. В данном интервале pH при 56%-НОЙ концентрации этилового спирта осаждается до 40% амилазы, а при других значениях pH всего от 2 до 8%. При pH 5,0—5,1 происходит наиболее полное разделение ферментативного комплекса. [c.61] Растворимость (осаждение) протеолитических ферментов значительно меньше зависит от pH среды. [c.61] Возможность фракционирования ферментного комплекса органическими растворителями обусловлена различием молекулярных весов или конформаций молекул различных фракций. На рис. 22 представлено осаждение амилазы и протеазы этиловым спиртом. [c.61] Вернуться к основной статье