ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Исследование фосфорорганических соединений из "Химия травляющих веществ Том 2" Раствор фермента — смесь равных частей 10%-ного водного раствора лио-филизированной сыворотки крови лошади и буферной смеси с pH 8,5. [c.208] Раствор субстрата — раствор 0,5% индоксилацетата (т. пл. 127—128 °С) в смеси, состоящей из 2 ч. ацетона, не содержащего альдегида, и 3 ч. воды. [c.208] Вынутые из разделительной камеры пластины, после испарения растворителя, помещают на 1 мин для окисления ингибиторов, действующих in vivo, в атмосферу паров брома (для in vitro-ингибиторов эта обработка парами брома отпадает). Пластины оставляют на 5—10 мин на воздухе для удаления избыточного брома и обрызгиванием равномерно пропитывают их раствором фер-метта. Выдерживают 30 мин в сосуде в атмосфере насыщенного водяного пара, после чего тотчас обрызгивают раствором субстрата и рассматривают в свете УФ-лампы. Через 1—2 мин ингибиторы обнаруживаются в виде темных пятен на сильно флуоресцирующем сине-зеленом фоне. По мере ослабления флуоресценции в результате окисления индоксила в индиго фон окрашивается в синий цвет, на котором выделяются белые пятна, образованные ингибитором. Этим способом можно обнаружить до 0,005 мкг ингибитора. [c.208] При использовании хромогенного субстрата, представляющего собой 0,05%-ный раствор 2-азобензол-1-нафтилацетата в ацетоне, и 2%-ного раствора сухой сыворотки в буферной смеси (pH7,5) достигается несколько меньшая чувствительность. При этом ингибитор обнаруживают по белым пятнам на красном фоне. [c.208] Вернуться к основной статье