ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Спектрофлуориметры из "Инструментальные методы химического анализа " Основная особенность конструкции флуориметров заключается в наличии двух оптических систем, одна для возбуждающего, другая для флуоресцентного излучения. Монохроматоры могут использоваться в одной или обеих системах или могут быть заменены светофильтрами. [c.156] Работа на спектрофлуориметре обычно состоит из ряда операций. В результате ориентировочных предварительных исследований выбирают подходящую длину волны в спектре испускания и настраивают второй монохроматор на эту длину волны. Затем записывают спектр возбуждения на первом монохроматоре. Аналогично получают спектр испускания сканированием на втором монохроматоре, настроив первый на соответствующую длину волны. Для большинства веществ изменение выбранной длины волны на первом монохроматоре мало влияет на спектр излучения, как бы далеко ни отстояла она от максимума. [c.157] Спектрофлуориметры используются для выбора условий определения и изучения влияния мешающих веществ, а также для выполнения серийных анализов. В последнем случае для повышения точности результаты следует сравнивать с результатами, полученными на том же приборе для стандартных растворов. Часто спектры, полученные на разных приборах, отличны друг от друга прежде всего вследствие изменения длины волны излучения источника, абсолютной чувствительности детектора и эффективности монохроматоров. Наблюдаемые спектры представляют некую комбинацию спектральных свойств вещества и ложных сигналов, даваемых прибором. Такие отклонения особенно существенны при измерении квантового выхода флуоресценции. [c.157] Спектрофлуориметр можно откалибровать путем строгого сравнения со стандартными источниками и термопарой или предварительной калибровкой фотоумножителя. Полученные таким способом поправки могут быть довольно большими поправочный коэффициент изменяется от значения менее единицы до значения 50 или выше [7] (рис. 6-6). [c.157] Для того чтобы исключить многие неудобства этого метода, для сравнения используют флуоресцирующее стандартное вещество, в качестве которого рекомендован [8] хелат алюминия с азокрасителем понтахромовым черно-синим Р. Известно, что родамин 60 обладает характерным откликом на возбуждение в широком интервале длин волн (220—600 нм) и, следовательно, может использоваться как счетчик фотонов, что облегчает калибровку фотоумножителя [9]. Использование способов калибровки, описанных в упомянутых выше работах, в будущем должно привести к уменьшению сообщений о нескорректированных спектрах. [c.157] Как показано на рис. 6-5, спектрофлуориметр не является двухлучевым прибором в том смысле, в каком этот термин используется в абсорбционной спектроскопии. Второй фотоумножитель служит только для корректировки изменений режима лампы. Фон, возникающий из-за флуоресценции растворителя и реагентов или из-за рассеяния света частицами пыли и т. п., определяют путем измерения холостой пробы и затем вычитают эту операцию легко выполнить на современных приборах с микропроцессорной техникой. [c.158] Вернуться к основной статье