ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Определение дисистона и тимета в сельскохозяйственных культурах энзиматическим методом из "Определение ядохимикатов в биологических субстратах" Ход анализа. Исследуемый растительный образец мелко нарезают, заливают хлороформом и экстрагируют в течение часа в аппарате для встряхивания. Экстракт обезвоживают, пропуская через слой сернокислого натрия. В дальнейший анализ берут такое количество экстракта, которое содержит 5—20 мкг дисистона. Упаривают растворитель в небольшом сосуде до образования сухого остатка к остатку приливают 5 мл бензола, растворяют при легком леремешивании и переносят в пробирку с притертой пробкой. Добавляют 3 мл окисляющей смеси и несколько стеклянных бусинок, закрывают пробирку, слегка встряхивают несколько раз, затем вынимают пробку и помещают пробирку в термостат с температурой 75° на 20 мин. По истечении этого времени вынимают из термостата и охлаждают на льду. Добавляют 5 мл дистиллированной воды, закрывают пробкой и тщательно перемешивают. [c.46] В несколько стаканчиков (объемом 20 мл) вносят по 4 капли масляного раствора. Когда верхний бензольный слой в пробирке просветлеет, переносят его отдельными измеренными порциями в разные стаканчики. Эти порции должны содержать от 0.6 до 2 мкг дисистона. Вьшаривают бензол и продолжают вьшаривание до тех пор, пока не будут ликвидированы следы уксусной кислоты, что можно установить по запаху. В каждый стаканчик добавляют по 5 мл дистиллированной воды, покрывают стаканчики алюминиевой фольгой и помещают их на 10 мин. на нагреватель, с температурой 120°. При этом не должно произойти заметной потери воды из стаканчиков за счет ее испарения. В два чистых стаканчика также вносят но 5 мл дистиллированной воды, покрывают фольгой и производят с ними в дальнейшем те же манипуляции, что и со стаканчиками, содержащими искомые вещества (результаты анализа содержимого этих стаканчиков дадут величину фона). С этого момента можно оставить стаканчики на ночь и дальнейший анализ выполнять па следующий день. [c.46] В каждый стаканчик вносят по 0.6 мл плазмы, основательно перемешивают и помещают их в термостат с температурой 37.5° на 70 мин. Убирают фольгу, закрывающую стаканчики, и из каждого из них по 1 мл переносят в 5-миллилитровые стаканчики, уже содержащие по 1 мл буферного раствора. В каждом стаканчике измеряют pH (начальный). К содержимому каждого стаканчика добавляют по 0.2 мл раствора ацетилхолина, перемешивают и помещают на 2 часа в термостат с температурой 37.5°. По прошествии этого срока оставляют стаканчики на 5 мин. при комнатной температуре и производят измерение pH (конечный). [c.46] При указанных условиях проведения анализа разность pH в случае фона должна лежать в пределах 1.8—2.0 единиц. Зная процент ингибиции для каждого образца, по градуировочному графику определяют содержание дисистона в этом образце, а затем рассчитывают его содержание в анализируемой ткани. [c.47] Для построения градуировочного графика готовят раствор дисистона в бензоле с концентрацией 10 мкг/мл. Хранят раствор в бутыли с притертой пробкой в холодильнике. При построении графика переносят 5 мл этого раствора в пробирку с притертой пробкой, добавляют 3 мл окисляющей смеси и ведут анализ так, как это уже описано. Бензольный раствор отбирают двумя параллельными порциями по 0.05, 0.06, 0.08, 0.10, 0.15, 0.20, 0.25 мл и помещают их в 20-миллилитровые стаканчики. Результаты анализа наносят на график, одна из осей которого является логарифмической. По обычной оси откладывают процент ингибиции, по логарифмической — количество микрограммов дисистона в конечном растворе. В интервале от 20 до 75% ингибиции холинэстеразной активности график является прямой линией. [c.47] При использовании одних и тех же реактивов и плазмы наклон градуировочного графика от опыта к опыту не изменяется. Однако его положение может изменяться. Поэтому при желании получать очень точные результаты следует в каждый опыт включать анализ двух образцов, приготовленных из стандартного раствора и содержащих по 1 мкг дисистона. Ингибиция, полученная при анализе этих образцов, дает точку, через которую следует провести градуировочный график для данного опыта параллельно основному градуировочному графику. [c.47] При использовании новой плазмы или других реактивов следует заново строить градуировочный график. [c.47] Реактивы, аппаратура и ход анализа в основном остаются теми же, что и при анализе дисистона. Изменения заключаются в следующем. [c.47] Вернуться к основной статье