ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Фиксация и гистологическая обработка материала из "Микробиологические методы борьбы с вредными насекомыми" На приготовлеиные вышеуказанным образом мазки после их высыхания наливают метиловый спирт и этим частично устраняют остатки жирового тела и в достаточной мере фиксируют различные стадии развити5Г паразита. [c.52] Для приготовления влажного мазка берут пинцетом кусочек ткани исследуемого насекомого и делают им мазок на покровном стекле, которое немедленно кладут мазком вниз на поверхность фиксирующего раствора. Через секунду предметное стекло утепляют в фиксирующем растворе и оставляют в нем на 5—10 минут. Затем стекло с фиксированным мазком промывают водой и окрашивают как гистологический срез, не допуская высыхания стекла. [c.53] Мазки зараженного материала окрашивают после фиксации раствором Гимза (1 капля концентрированного раствора на 1 мл дистиллированной воды) в течение 30—60 минут. Кокцидии и схи-зогрегарины в мазках окрашиваются очень плохо, но в срезах хорошо. Окрашиванию большинства спор помогает кратковременный гидролиз в 0,1—1%-ном растворе соляной кислоты при 70— 80° С. [c.53] Для приготовления препаратов слизистых оболочек спор суспензию спор обрабатывают обычной тушью или тушью Бури (под покровным стеклом). При исследовании под микроскопом таких мазков, контрастированных тушью, можно отчетливо видеть внешние очертания спор и после фиксации окрасить препарат раствором Гимза. [c.53] Окраску раствором Гимза можно использовать и при изготовлении препаратов для гистологических исследований. В этих случаях препараты окрашивают слабым раствором Гимза и оставляют их на ночь, затем промывают водой, дифференцируют, обезвоживают ацетоном, переносят в нейтральный чистый ксилол и в нейтральную заливочную среду, например в канадский бальзам или акриловые препараты (паркетолит). [c.53] Ваго для окрашивания полиэдров вирусов в тканях применяет окрашивание в течение 2—10 минут смесью двух растворов. Раствор А 10 мл анилинового масла в 200 мл дистиллированной воды смешивают с кислым фуксином до насыщения. Раствор Б 1%-ная метиленовая синяя. Затем перед окрашиванием смешивают 3 мл раствора Б со 100 мл раствора А и окрашивают препарат при 60° С в течение 10 минут. После этого препарат промывают в горячем этиловом спирте и докрашивают 5—15 минут в 1%-ном растворе метаниловой желтой. [c.54] Полиэдры в тканях, которые обычно не окрашиваются, можно красить гематоксилином после предварительного подогрева препарата или же после предварительной обработки ш,елочью или кислотой. [c.55] При реакции на ядро материал, который был зафиксирован фиксатором без формалина по Фельгену, гидролизуют 1 н. НС1 (8,5 мл концентрированной соляной кислоты в 100 мл дистиллированной воды) при 60° С. После промывки холодной дистиллированной водой, материал помещают на 1—2 часа в сернистокислый фуксин, приготовленный из насыщенного при подогреве раствора основного фуксина (0,5 г фуксина в 100 мл кипящей воды), к которому по охлаждении добавляют 1 г NaHSOs и 10—20 мл 1 и. НС1. Через 24 часа раствор отмывают. После окрашивания материал промывают водой с SO2 (100 мл воды, 5 мл 1 н. НС1 и 1 г NaHSOs), затем чистой водой и докрашивают 1%-ным раствором светлой зеленой. [c.55] Для заливки препаратов обычно применяют канадский бальзам, но в некоторых случаях используют также искусственные смолы типа aedax (паркетолит). Процесс переноса и заливки препаратов описан в руководствах по гистологии [13]. [c.55] Для изучения болезней насекомых в теле хозяина готовят мик-ротомные срезы в парафине, как правило, из целого организма и в последовательных сериях, что позволяет проследить пространственное распределение инфекции. Для того чтобы можно было установить различия в строении тканей больных и здоровых насекомых, необходимо фиксировать и готовить препараты также и из здоровых насекомых. [c.55] Наличие у насекомых хитинового скелета и других органов затрудняет изготовление микротомных срезов. Для облегчения этой работы следует проводить материал через бутиловый спирт, при этом материал проводится через следующий ряд этанол—этанол бутанол (1 1) —этанол бутанол (1 3) — бутанол — бутанол парафин (1 1)—парафин—парафин и заливка. [c.55] Иногда насекомых проводят сразу через парафин, извлекают особь из расплавленного парафина, дают последнему застыть и скальпелем отделяют твердые поверхностные хитиновые части. Остаток тела насекомого вновь переносят в парафин и заканчивают заливку. [c.55] Для электронной микроскопии делают препараты из срезов материала, залитого в смеси метил- и бутил-метакрилата или в Westopal (методика подробно описана в работе Бартла и др.[3]). [c.56] Вернуться к основной статье