ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Белки сыворотки крови из "Химия и биология белков" Л —альбумин Г—глобулин Ф — фибриноген. [c.172] МИНЫ — при концентрации 2,57 моль1л [12]. Для получения больших количеств глобулинов этот метод удобнее электрофоретического получаемые отдельные фракции содержат, однако, некоторое количество примесей белков других смежных фракций. Сернокислый аммоний в качестве осадителя обладает и еше одним недостатком он содержит азот, что делает невозможным прямое определение азота в выделенных белках по методу Кьельдаля. Поэтому в клинике для количественных определений альбуминов и глобулинов в сыворотке крови вместо сульфата аммония пользуются сернокислым натрием [9]. [c.173] Сернокислый натрий осаждает глобулины сыворотки при концентрации 21,5%, альбумины же определяются в фильтрате после удаления глобулинов. Осаждение и фильтрование проводятся при 37°, так как сернокислый натрий недостаточно растворим при комнатной температуре. Недавно, однако, было обнаружено, что при фракционировании белков сыворотки указанным методом значительные количества -глобулинов остаются во фракции альбуминов. В связи с этим было предложено повышать концентрацию сернокислого натрия до 26,8%, так как при этой концентрации г-глобулины осаждаются полностью и у-глобулины осаждаются при концентрации сернокислого натрия 19,6% [13]. [c.173] Фракция IV- осаждается при понижении концентрации этилового спирта до 18% и pH до 5,2. Она состоит из а-глобулинов в ней найден липопротеин [17], содержащий около 35% липидов (холестерин, жирные кислоты и фосфолипиды) (см. гл. XI), а также сине-зеленый пигмент. [c.175] Фракция V осаждается при понижении pH до 4,8 при помощи ацетатного буфера (концентрация спирта поддерживается все время неизменной — 40%). Эта фракция содержит большую часть сывороточного альбумина, который можно получить в виде кристаллов [20]. Жидкость, слитая с осадка от фракции V (фракция VI), содержит небольшие количества альбумина и а-глобу-лина. [c.175] Данные относительно изоэлектрических точек и электрофоретической подвижности некоторых фракций приводятся в табл. 13 [11]. Величины подвижностей при pH 7,7 вычислены для 1-процентных растворов очищенных фракций при 0° и при ионной силе 0,2. [c.176] Необходимо указать, что кроме этилового спирта для осаждения белков применяются и другие органические растворители, например метиловый спирт [33] или смесь метилового спирта с ме-тилалем (СН3ОСН2ОСН3) [34]. [c.177] Недавно для фракционирования белков плазмы крови начали применять также соли тяжелых металлов, в частности соли цинка [35]. Осаждение белков большими количествами солей тяжелых металлов приводит к необратимой их денатурации, прибавление же небольших количеств солей вызывает обратимое связывание катионов белками (по всей вероятности, сульфгидрильными группами белка) с образованием осадков, из которых можно выделить нативный белок [35]. [c.177] Время от времени в литературе появляются сообщения о превращениях альбумина в глобулин при воздействии различных реагентов, например смеси этилового спирта с диэтиловым эфиром, гепарина и некоторых других соединений. Само собой разумеется, что речь идет не о подлинном превращении такое превращение было бы невозможно, так как альбумины по своему аминокислотному составу отличаются от глобулинов (см. табл. 1). Речь может идти только о том, что при определенных экспериментальных условиях растворимость альбумина изменяется, в результате чего он по своим физико-химическим свойствам становится похожим на глобулин. Поэтому вполне возможно, что в нативной плазме крови имеется лишь небольшое количество белков и что многие из выделенных белковых фракций образованы путем соединения этих основных белков с липидами, углеводами, друг с другом, а также с некоторыми ионами. [c.178] С другой стороны, мы должны признать, что усовершенствование методов фракционирования белков позволило установить присутствие в плазме большого числа новых белковых фракций. Прежние представления о том, что в плазме крови содержится только один альбумин и один глобулин, пришлось оставить и признать, что в ней имеются а-, и у-глобулины, причем каждая из этих фракций, в свою очередь, может быть разделена на две под-фракции и более. Путем дальнейшего усовершенствования методов можно, очевидно, получить из плазмы еще большее количество белковых фракций. Возможно, что в плазме крови вообще нет совершенно чистых однородных белков. Иммунологические исследования показали, что при инъекции антигена в крови появляется ряд специфических глобулинов (антител), обладающих различной способностью реагировать с полярными группами антигена [37]. Возможно, что так же обстоит дело и с нормальными сывороточными глобулинами, т. е. что в нормальной плазме содержатся различные типы глобулинов, между которыми существуют промежуточные формы. Если это так, то безнадежны все попытки выделить совершенно однородные глобулины из плазмы крови. [c.178] Изменения в белковой картине плазмы можно обнаружить электрофоретическим путем. Электрофоретические диаграммы отражают не только увеличение общего количества белка в плазме или количества альбуминов и глобулинов, но и изменения в соотношении количества альбуминов и глобулинов или появление ненормального типа белков [41]. [c.179] Существует несколько простых методов, при помощи которых в клинике можно быстро обнаружить изменения в количественных соотношениях белковых фракций плазмы [5]. Одним из этих методов служит метод Таката—Ара к испытуемой сыворотке прибавляется раствор хлористой ртути и углекислого натрия и определяется способность сыворотки препятствовать осаждению ртутной соли углекислым натрием. Чем выше отношение альбумины/глобулины, тем выше эта защитная способность сыворотки. Эта реакция положительна при некоторых болезнях печени. [c.179] Другим методом является тимоловая проба [42]. Сыворотка смешивается с барбитуровым буфером (pH 7,8), насыщенным тимолом. Нормальная сыворотка при этом остается прозрачной, у больных же с заболеванием печени сыворотка часто мутнеет. Это помутнение обусловлено увеличением содержания в сыворотке у-глобулинов, фосфолипидов и холестерина. В нормальной сыворотке количество альбуминов достаточно, чтобы воспрепяг-ствовать появлению мути [43, 44]. [c.180] Как видно из изложенного, в этих клинических методах использовано свойство альбумина препятствовать образованию осадка или мути. Это свойство присуще только альбуминам, но не глобулинам. Защитное действие альбумина обусловлено наличием на поверхности его молекул большого числа отрицательно заряженных групп, а также способностью альбумина легко соединяться с анионами (см. стр. 221). Молекулы сывороточного альбумина, изоэлектрическая точка которого лежит примерно при pH 4,7, имеют при pH 7,0 большой избыток отрицательно заряженных групп. Число ионных групп в молекуле глобулина при этом значении pH гораздо меньше, так как изоэлектрическая точка этого белка лежит примерно при pH 6,0. [c.180] Данные, полученные на сыворотке человека, нельзя целиком переносить на сыворотку других животных. У разных видов животных содержание в сыворотке альбуминов и различных типов глобулинов колеблется в широких пределах [45]. Отмечены также и возрастные особенности. Плазма новорожденных животных, как правило, содержит мало глобулинов так, например, в плазме новорожденного жеребенка содержится 3,7% белка, причем на долю альбумина приходится 65%, л-глобулина — 32%, Р-глобулина — 3%, у Глобулина — 0%. Плазма же 10-летней лошади содержит 7% белка, из которого на долю альбумина приходится 30%, -глобулина—11%, р-глобулина—12% и у-глобулина — 47%. Приведенные цифры показывают, что в плазме новорожденного жеребенка совершенно нет углобули-нов, а содержание а- и Р-глобулинов значительно меньше, чем в плазме взрослой лошади [46]. Плазма новорожденного кролика содержит только 0,2 /о глобулинов и 4,8% альбумина [47]. [c.180] Вернуться к основной статье