ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Разделение пигментов зеленых листьев растений методом адсорбционножидкостной хроматографии из "Основы аналитической химии" Хлорофилл — зеленый пигмент растений — состоит из смеси нескольких пигментов. При пропусканий раствора хлорофилла через колонку происходит сорбция и разделение пигментов в соответствии с их избирательной сорбируемостью. [c.295] Хроматографическое разделение пигментов зеленых листьев растений состоит из следующих этапов 1) экстрагирование пигментов из растительного материала 2) образование хроматограмм 3) получение растворов хлорофилла-а, хлорофилла-р и каротиноидов. [c.296] При подготовке раствора для хроматографирования пигменты извлекают из растительного материала полярным растворителем, а затем растворяют в смеси неполярных растворителей. Полученный раствор хроматографируют. Первичную хроматограмму промывают полярным растворителем и в вытекающем растворе собирают отдельные фракции пигментов. [c.296] Методика определения. Для анализа берут навеску растительного материала из свежих зеленых (3—5 г) илн сухих листьев (1 г). Свежий растительный материал помещают в фарфоровую ступку и тщательно растирают. Для лучшего растирания. прибавляют мелкое стекло или кварцевый песок. Если для опыта взят сухой материал, то его измельчают в ступке. [c.296] В полученную растертую массу добавляют 15 мл смеси бензина и бензола (9 1) и 10 мл ацетона, снова растирают и перемешивают. Смесь переносят на стеклянный фильтр 2. Ступку очищают, ополаскивая ее чистым ацетоном. Промывную жидкость также переносят на фильтр 2. Экстракт пигментов отфильтровывают. Для более полного отделения пигментов оставшуюся на фильтре массу промывают несколькими порциями ацетона (по 5 мл) до тех пор, пока вытекающий фильтрат не станет бесцветным, т. с. не будет содержать пигментов. [c.296] Полученный после фильтрования экстракт пигментов переносят из приемника в делительную воронку, отделяют ацетон путем осторожного введения в воронку 50 мл дистиллированной воды. Жидкость в делительной воронке слегка взбалтывают. Следует избегать сильного взбалтывания, так как может образоваться стойкая эмульсия. [c.296] После того как произойдет расслаивание двух несмешивающихся жидких фаз, нижнюю фазу (вода — ацетон) сливают. В делительную воронку осторожно вводят новую порцию воды (50 мл). После расслаивания жидкостей водную фазу сливают. Операцию отмывания ацетона повторяют 10 раз. Бензино-бензольный экстракт просушивают после удаления всех водорастворимых веществ. Для этого экстракт переносят в колбу емкостью 50 л л, в которую добавляют 2—3 г прокаленного сульфата натрия. Экстракт отфильтровывают через стеклянный или бумажный фильтр. [c.296] Хроматографирование проводят в стеклянной колонке размером 20X1 см (см. рис. 111). Внизу колонки помещают ватный тампон и вносят небольшими порциями сорбент СаСОз или сахарный порошок. Уплотнение сорбента проводят постукиванием трубки о твердую поверхность. [c.296] В подготовленную колонку вводят порцию (5 уил) экстракта. Полученную первичную хроматограмму промывают смесью бензина и бензола (9 1). При промывании колонки происходит разделение зон, вверху колонки образуется зеленая зона р-хлорофилла, затем сине-зеленая а-хлорофилла, несколько ниже располагается зона желтого цвета (каротиноиды). [c.296] Вернуться к основной статье