ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Разделение, качественное и количественное определение аминокислот из "Основы аналитической химии" Разделение сложной смеси аминокислот на составные части основано па различии коэффициентов распределения аминокислот в двух несмешивающихся растворителях. Для качественного анализа хроматограмму проявляют и определяют содержащиеся в растворе аминокислоты путем подбора свидетелей или расчета коэффициента R . [c.299] Для количественного анализа проводят определения концентрации аминокислот по интенсивности окраски нли раз иерам пятен хроматограмм, а также путем элюирования аминокислот из отдельных пятен и последующего определения нх классическими количественными методами анализа. [c.299] Если пятна на хроматограмме перекрываются нли по какой-либо причине контуры их искажаются, то данный метод не мол сет быть использован для количественного определения. [c.299] Предварительная обработка может быть исключена, если бумага не содержит ионов тяжелых металлов. [c.300] Растворитель. н-Бутиловый спирт — уксусная кислота — вода (4 1 5). Смесь встряхивают 1—2 мин и после расслаивания отделяют слои. [c.300] П р о я в и т е л ь — 0,2%-ный раствор нингидрина в безводном ацетоне (200 мг нингидрина растворяют в 100 мл чистого ацетона). Хранят проявитель в сосуде из темного стекла. [c.300] Растворы аминокислот свидетелей . В качестве свидетелей применяют 0,01 М растворы чистых аминокислот. Навески аминокислот, необходимые для приготовления 10 мл 0,01 М раствора (табл. 10), берут на аналитических весах и растворяют в воде или 10%-ном изопропиловом спирте. Раствор тирозина подкисляют 0,1 н. раствором НС1 до его полного растворения. [c.300] Аргинин солянокислый. Аспарагиновая кислота. [c.300] Глутаминовая кислота. Изолейцин (лейцин). . [c.300] Тирозин (навеска для 0,005 М раствора). . . [c.300] После окончания разделения хроматограмму высушивают на воздухе и проявляют раствором нингидрина путем опрыскивания из пульверизатора. З-атем нагревают 15—20 мин при 60° С в термостате или сушильном шкафу. Расположение аминокислот сверху вниз по направлению движения растворителя следующее цистин, лизин, аргинин, гистидин, аспарагиновая кислота, серии (три последние аминокислоты располагаются в виде тесно сближенных пятен) глутаминовая кислота, треонин, аланин, пролин, тирозин, валин, метионин, триптофан, фенилаланин, лейцин, изолейцин (последние три аминокислоты также часто располагаются в виде тесно сближенных пятен). [c.301] Хроматограмму проявляют 0,2%-ным раствором нингидрина в ацетоне. Для того чтобы сохранить пятна на хроматограмме, их фиксируют 1%-ным раствором нитрата меди в ацетоне, погружая хроматограмму в этот раствор или опрыскивая ее из пульверизатора. После фиксации пятна приобретают красно-оранжевую окраску. [c.301] Качественный состав аминокислот в исследуемом растворе определяют путем сопоставления положения пятен известных веществ — свидетелей с положением пятен, полученных для анализируемого раствора. [c.301] Коэффициент 7 , определяют для каждой аминокислоты (см. рис. 117). Одна и та же аминокислота при одних и тех же условиях, опыта имеет постоянную величину / /. По полученным величинам Нг можно в последующих опытах определить качественный состав смеси аминокислот без применения свидетелей . [c.301] Подготовка бумаги — см, стр. 299. [c.301] Проявитель — 0,5%-ный раствор нингидрина, который готовят растворением нингидрина в ацетоне, ледяной уксусной кислоте и воде (95 1 4) непосредственно перед определением. [c.301] Калибровочный график. Для построения калибровочных графиков готовят 0,01 М растворы аминокислот. Навески аминокислот, необходимые для приготовления 10,0 лгл 0,01 Ж растворов, приведены выше (см. табл. 10). [c.301] С помощью микропипетки наносят на бумагу 5, 10, 15 и 20 мкл стандартного раствора порциями по 5 мкл с таким расчетом, чтобы каждая точка будущего калибровочного графика соответствовала 0,05 0,10 0,15 и 0,20 мкг аминокислоты. [c.301] Растворитель пропускают через бумагу столько раз, сколько это необходимо для четкого разделения аминокислот исследуемой пробы, Хроматограмму затем высушивают, проявляют, погружая на несколько секунд в 0,5%-ный раствор нингидрина, снова подсушивают в течение нескольких, минут на воздухе и нагревают для развития окраски (15 мин) в сушильном шкафу при 60° С. [c.301] Вернуться к основной статье