ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Разделение пигментов зеленых листьев растений методом адсорбционно-жидкостной хроматографии из "Практикум по хроматографическому анализу" Цель работы разделение пигмента зеленого листа растений и препаративное выделение отдельных пигментов в чистом виде. [c.28] Хлорофилл — зеленый пигмент растений — состоит из смеси нескольких пигментов. При пропускании вытяжки из зеленого листа через сорбционную колонку происходит разделение пигментов в соответствии с избирательной адсорбируемостью, при этом химический состав пигментов не изменяется, что и позволяет использовать хроматографический метод для препаративного получения отдельных пигментов в чистом виде. [c.28] Для анализа берут навеску растительного материала из сухих листьев (1 г) или из свежих зеленых листьев (5 г). Если для опыта взят сухой материал, то его измельчают и помещают в колбу емкостью 50 мл. Если же для анализа берут растительный материал из свежих зеленых листьев, то навеску помещают в фарфоровую ступку и тщательно растирают. Для лучшего растирания прибавляют стекло или кварцевый песок. К растертым листьям прибавляют 15 мл смеси бензина и бензола в соотношении 9 1 и 10 жтг ацетона, снова растирают и перемешивают содержимое. Смесь переносят в стеклянный фильтр 2. Ступку (или колбу) споласкивают чистым ацетоном и промывную жидкость также переносят на фильтр. Экстракт пигментов отфильтровывают. Остаток на фильтре промывают несколькими порциями (по 5 мл) ацетона до тех пор, пока вытекающий фильтрат станет прозрачным, т. е. не будет содержать пигментов. [c.29] Полученный после фильтрования экстракт пигментов переносят в делительную воронку. Чтобы удалить ацетон, в воронку осторожно вводят 50 мл дистиллированной воды. Смесь слегка взбалтывают (следует избегать сильного взбалтывания, так как может образоваться стойкая эмульсия). После полного расслаивания несмешиваю-щихся жидких фаз нижнюю фазу (водный ацетон) сливают и осторожно вводят в делительную воронку новую порцию воды (50 мл). После расслаивания жидкостей водную фазу сливают. Эту операцию повторяют 10 раз. [c.29] В стеклянную трубку высотой 200 мм, диаметром 10 мм с небольшим отверстием внизу помещают ватный тампон. Затем в трубку вносят небольшими порциями сорбент — карбонат кальция или сахарный порошок. Чтобы уплотнить сорбент, слегка постукивают трубкой по твердой поверхности. [c.30] В хроматографическую колонку вводят 5 мл экстракта. Образуется первичная хроматограмма, которую промывают смесью бензина и бензола (10 1). При промывании колонки происходит разделение зон вверху колонки образуется зеленая зона чистого хлорофилла р, далее — зона хлорофилла а и ниже располагается зона желтого цвета — каротиноиды. При дальнейшем промывании колонки растворителем в фильтрат переводятся сначала желтые пигменты (каротиноиды), затем хлорофилл а и последним хлорофилл р. Каждую фракцию собирают в отдельный приемник. [c.30] Вернуться к основной статье