ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Определение аскорбиновой кислоты и родственных ей соединений методом распределительной хроматографии на бумаге из "Практикум по хроматографическому анализу" Цель работы отделение аскорбиновой кислоты от примесей методом распределительной хроматографии на бумаге и определение ее количественного содержания в растворе. [c.118] Витамин С встречается в виде трех форм -аскорбиновая кислота (свободная, восстановленная форма), де-гидроаскорбиновая форма (обратимо окисленная), ас-корбиген (связанная форма). [c.119] Аскорбиновую кислоту можно окислить иодом или восстановить сероводородом и хроматографировать ее окисленную, или восстановленную форму. Наиболее устойчивым является аскорбиген, но он обладает высокой чувствительностью к щелочам. Поэтому для хроматографирования аскорбигена выбирают менее полярные нейтральные или слабокислые растворители. Аскорбиген устойчив к действию кислорода воздуха, поэтому при его хроматографировании не требуется специального оборудования. Все три формы кислоты чувствительны к свету. [c.119] Вещества, мешающие определению аскорбиновой кислоты методом титрования, имеют значения. / /, отличные от Ri кислоты, что позволяет отделять ее от примесей с помощью распределительной хроматографии на бумаге. [c.119] Раствор, содержащий аскорбиновую кислоту и примеси, наносят на бумагу. На некотором расстоянии помещают растворы свидетелей -аскорбиновой кислоты, дегидроаскорбиновой кислоты, аскорбигена и др. (см. табл. 6). О присутствии кислоты судят по величине Я] (ориентировочно) либо сравнивая расположение в хроматограмме пятен кислоты и растворов-свидетелей. [c.119] Для количественного определения вещество из зоны элюируют и определяют колориметрическим или спектрофотометрическим методом с предварительным построением соответствующей калибровочной кривой. [c.119] Аскорбиновая кислота легко окисляется, поэтому работу следует проводить как можно быстрей. [c.119] Так как свободная кислота легко окисляется, хроматограмму получают в токе водорода, двуокиси углерода или инертного газа. [c.120] Хроматограмму получают нисходящим или восходящим способом. Через 12—18 ч хроматограмму вынимают, подсушивают на воздухе и сразу же проявляют реактивами, приведенными в табл. 5. Проявление основано на сильной восстановительной способности аскорбиновой кислоты. Качественно определяют кислоту либо по окраске пятна, либо по величине Rf. [c.120] Цель работы разделение высших жирных кислот методом иобраш,енных фаз , т. е. методом непрерывного распределения кислот между неподвижной гидрофобной фазой и подвижной гидрофильной фазой. [c.122] В методе обращенных фаз хроматографируемые вещества растворены в неподвижной гидрофобной фазе и разделяются вследствие распределения между ней и подвижной гидрофильной фазой. Для этого метода используют бумагу, пропитанную гидрофобным веществом, например вулканизованным латексом, насыщенную унде-каном, смесью триглицеридов растительных масел, силиконом, нафталином, парафином и т. д. На пропитанную полосу бумаги наносят хроматографируемый раствор и одновременно растворы свидетелей — веществ, предполагаемых в составе смеси. Полосу помещают в камеру. После разделения веществ хроматограмму вынимают, высушивают и проявляют. По расположению в хроматограмме зон исследуемых веществ и свидетелей определяют состав исследуемого раствора. [c.122] Приготовление раствора каучука. Каучук (1,5 г), свежевыделенный из кок-сагыза щелочным способом, измельчают и заливают 300 мл сухого бензола. Через сутки некаучуковые твердые остатки отделяют фильтрованием. Для работы используют неподвергшийся деструкции каучук. [c.123] Приготовление углеводородов. Продажный керосин встряхивают в делительной воронке в течение нескольких дней на механической установке с концентрированной серной кислотой, после чего отделяют нижнюю часть светло-желтой окраски. Последнюю высушивают в эксикаторе над безводным сульфатом натрия и подвергают фракционированию на углеводороды. Отбирают для работы фракцию, кипящую при 220—260° С. Приготавливают 5%-ный или 10%-ный раствор углеводородов в ацетоне. [c.123] Бумажную ленту протягивают через раствор каучука, подсушивают и вновь пропускают через раствор углеводородов. После повторного подсушивания бумага готова к употреблению. [c.123] Высшие жирные кислоты с 20—24 атомами углерода нерастворимы в холодной уксусной кислоте, поэтому для их разделения используют 99%-ную уксусную кислоту, подогретую до 30—40° С. Высушенную бумагу помещают в воздуходувку, создающую сильную струю воздуха, нагретого до 30—80° С Через 2 ч бумагу вынимают и проявляют. [c.124] Проявление хроматограммы. Хроматограмму помещают на 30 мин в раствор ацетата меди (П) (10 мл насыщенного водного раствора ацетата меди смешивают с 240 мл дистиллированной воды). После отмывания избытка ацетата меди в проточной воде в течение 30 мин хроматограмму помещают на 5—10 мин в разбавленньпг раствор ферроцианида калия (50 мл 7,5%-ного водного раствора ферроцианида смешивают с 250 мл воды). При этом пятна солей меди от соответствующих кислот окрашиваются в интенсивный темно-красный цвет. Фон остается светло-желтым или светло-красным. [c.124] Проявление хроматограммы можно осуществить также другим способом. Бумагу помещают в 1 %-ный раствор нитрата серебра в 10%-ном спирте, в темную склянку емкостью 250 мл. Через 15 мин жидкость сливают и бумагу заливают еще раз на 15 мин 1 %-ным раствором AgNOз в 50%-ном спирте для обнаружения насыщенных кислот. После этого раствор сливают для удаления остатков серебра. Полученную хроматограмму обрабатывают 1,5%-ным раствором НагЗ или 2 н. раствором (НН4)25. в зонах, содержащих серебряные соли жирных кислот, образуются темно-коричневые пятна сульфида серебра. Избыток сульфида натрия удаляют водой и хроматограмму высушивают. [c.124] Идентификацию отдельных пятен проводят при помощи свидетелей , а также с помощью величины Rf. [c.124] Цель работы качественное определение содержания смол в маслах с помош,ью люминесцентной хроматографии. [c.125] Полоску бумаги 4 длиной 150 см и щириной 1 см, чтобы освободить от возможных люминесцирующих примесей, помещают в аппарат Сокслета и в течение 6 ч экстрагируют смесью спирта и бензола (1 1 по объему). [c.125] Вернуться к основной статье