ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Хроматография на бумаге из "Техника лабораторной работы в органической химии Издание 3" В настоящее время хроматография на бумаге и тонкослойная хроматография широко применяются практически во всех лабораториях органической химии. [c.286] Необходимо помнить, что фильтровальная бумага легко адсорбирует влагу и пары различных веществ, например кислот, аммиака, аминов. Поэтому в лаборатории ее следует хранить в отдельном хорошо закрывающемся ящике, лучше всего герметизированном резиновой прокладкой. Не следует касаться пальцами той части бумаги, на которой будет происходить процесс хроматографирования, так как в отпечатках пальцев могут содержаться посторонние вещества, а также некоторые аминокислоты, выделяемые кожей. [c.287] Важно иметь в виду, что при изготовлении фильтровальной бумаги, включая и бумагу для хроматографии, волокна бумаги располагаются, главным образом, в одном направлении, что приводит к большей скорости движения жидкости в этом направлении, чем в перпендикулярном. Поэтому для получения хорошо воспроизводимых и сравнимых результатов нужно всегда брать бумагу, нарезанную в одном и том же направлении. В случае двухмерной хроматографии (см. ниже) следует всегда соблюдать одинаковую последовательность в выборе первого и второго направления хроматографирования. [c.287] Чтобы определить расположение волокон бумаги, на нее осторожно наносят каплю воды. Если при этом влажное пятно принимает слегка эллиптическую форму, то это и свидетельствует о разной скорости движения жидкости в перпендикулярных друг другу направлениях. [c.287] Техника бумажной хроматографии состоит в следующем каплю (или несколько капель) исследуемого раствора наносят на определенное место куска фильтровальной бумаги проявляющий растворитель равномерно движется по бумаге вследствие капиллярных сил в одном направлении без потерь за счет испарения, причем скорость движения линии фронта растворителя составляет обычно от 12—15 до 35—40 см ч в зависимости от качества бумаги. Вещества, входящие в состав исследуемой смеси, перемещаются по бумаге в том же направлении с различной скоростью, образуя отдельные зоны или пятна. Процесс истинной адсорбции веществ на волокнах целлюлозы также играет здесь не малую роль. [c.287] Известны разные способы осуществления бумажной хроматографии, характеризующиеся той или иной техникой выполнения восходящая хроматография, нисходящая хроматография, в том числе одномерная (линейная) и двухмерная, хроматография кольцевая, или радиальная. [c.288] Если желательно применить нисходящую хроматографию, то в верхней части герметически закрывемой камеры помещают лодочку с растворит-елем и погружают в него конец бумажной полосы, которую изгибают, опуская ее вниз. В этом сл чае исследуемый раствор наносят на полосу ниже места ее изгиба. [c.289] Для характеристики скорости движения веществ, входящих в состав хроматографируемой смеси, обычно приводят величину R , которая представляет собой отношение длины пути, пройденного данным веществом, начиная от места нанесения до центра круглого пятна (зоны) или до переднего фокуса, если пятно имеет эллиптическую форму, к расстоянию, пройденному фронтом растворителя, начиная от стартовой линии. Если пятно сильно вытянуто и имеет длинный хвост , то это свидетельствует либо о частичном изменении вещества в процессе хроматографирования, либо о слишком большом количестве его в точке старта. Чтобы избежать последнего, надо предварительно установить на нескольких стартовых точках оптимальную концентрацию, при которой образуются ясно видимые пятна хорошей формы. [c.289] Нужно иметь в виду, что абсолютное значение величины может довольно широко варьировать в зависимости от многих факторов температуры, состава растворителя, качества бумаги, длительности хроматографирования и др. Поэтому использование одной лишь величины Rf для идентификации мало целесообразно. [c.289] Если возможно, то лучше осуществлять хроматографирование со свидетелями . Для этого на одной полосе бумаги, рядом с местом нанесения исследуемого раствора, помещают по 0ДН011 или по несколько капель растворов чистых веществ, предположительно входящих в состав исходной смеси, и после хроматографирования наглядно сравнивают расположение полученных пятен (зон). Естественно, что данный прием требует применения соответственно более широкого куска фильтровальной бумаги и, следовательно, более широкого герметического сосуда для проявления хроматограммы. Если в распоряжении экспериментатора имеется лишь цилиндрический сосуд, диаметр которого меньше ширины бумаги для хроматографирования со свидетелями, то можно вести процесс на бумаге, свернутой в спиральный цилиндр (см. рис. 170). Разумеется, при этом бумага должна быть достаточно плотной. [c.289] Еще лучшего разделения компонентов сложных смесей удается достичь при помощи двухмерной хроматографии. В этом случае также применяют не полоски фильтрова.т1Ьпой бумаги, а прямоугольники с длиной стороны примерно 300—500 мм. Исследуемый раствор наносят вблизи одного из углов прямоугольника и хромато грамму проявляют дважды сперва одним растворителем, а затем, после высушивания и поворота на 90°, — другим. [c.289] В него погружен. Весь прибор помещают в камеру того же формата. Проявляющий растворитель поднимается по фитилю и равномерно распространяется по фильтровальной бумаге, образуя фронт в виде окружности и зоны соответствующей формы (рис. 171, б). [c.290] Для проявления хроматограммы на бумаге обычно применяют полярные растворители, насыщенные водой, или их смеси. Наиболее употребительны растворители, приведенные в табл. 103. [c.290] Разумеется, указанные в таблице соотношения могут быть при необходимости изменены. [c.291] Если веш,ества, подвергаемые хроматографированию на бумаге, бесцветны, то для обнаружения образовавшихся зон следует, после высушивания хроматограммы, применить соответствующий реагент, раствором которого обрызгивают бумагу при помощи пульвериза-тора. В случае хроматографирования смеси аминокислот обычно применяют нингидрин, вещества кислотного или основного характера обнаруживают соответствующим индикатором, иногда пользуются разбавленным раствором перманганата и т. п. Нередко лучшие результаты можно получить при рассматривании хроматограммы в ультрафиолетовом свете. [c.291] Гомологические алифатические кислоты в условиях бумажной хроматографии показывают отчетливое различие Rf в зависимости от величины молекулярного веса. Чем больше молекулярный вес, тем быстрее движется зона кислоты. В результате раздельных опытов с аммонийными солями карбоновых кислот путем восходящего линейного хроматографирования с проявлением смесью 1 мл концентрированного раствора аммиака и 100 мл 95%-ного спирта и последующим окрашиванием пятен раствором 50 мг бромфенолблау и 200 мг лимонной кислоты в 100 мл воды были получены следующие данные (табл. 104). [c.291] Аналогичные наблюдения были сделаны в отношении а-амипо-кислот. При восходящем линейном хроматографировании с помощью смеси фенола с водой (80 20) и окрашивании пятен раствором 400 мг нингидрина и 1,5 коллидина или пиридина в 100 лел 95%-ного этанола были получены величины Rf, приведенные в табл. 105. [c.291] Как видно из таблицы, в каждой группе близких по строению аминокислот значение Rf возрастает с увеличением молекулярного веса, что соответствует уменьшению их гидрофильности. В последней группе собраны аминокислоты различной структуры и сопоставление их молекулярных весов не характерно. [c.291] Иногда, для уменьшения гидрофильности бумаги в хроматографии, ее предварительно обрабатывают уксусным ангидридом, после чего промывают водой до полного исчезновения кисло11 реакции и высушивают. [c.293] В особых случаях применяют специально импрегпированную бумагу, что позволяет одновременно использовать и другие адсорбенты. Для приготовления бумаги с окисью алюминия фильтровальную бумагу пропитывают раствором 20 г алюмокалиевых квасцов в 100 мл воды, отжимают между листами сухой фильтровальной бумаги, оставляют на ночь в атмосфере аммиака, затем промывают в проточной воде в течение 6 ч и высушивают при 110 °С. Проявление хроматограммы на такой бумаге следует осуществлять при помощи безводных растворителей. Для приготовления бумаги с силикагелем фильтровальную бумагу пропитывают разбавленным водой раствором жидкого стекла (1 1), так же отжимают ее между листами сухой фильтровальной бумаги, опускают в 6 п. соляную кислоту, после чего промывают в проточной воде в течение нескольких дней до исчезновения кислой реакции и высушивают при 110 °С. [c.293] Вернуться к основной статье