ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Полуколичественное определение фенола в моче из "Превращения и определение промышленных органических ядов в организме" Реактивы. 1. Реактив Джибса. 0,05% раствор 2,6-дихлорхи-нон-4-хлоримида в абсолютном этиловом спирте. Реактив сохраняется более полугода в склянке темного стекла. [c.40] Ход анализа. 1 мл исследуемой мочи помещают в пробирку с притертой пробкой и добавляют 0,4 мл хлорной кислоты. Пробирку помещают на 10 мин в кипящую воду для гидролиза фенольных конъюгатов и затем быстро охлаждают под краном до комнатной температуры. Добавляют 4 мл эфира, закрывают пробкой и 5 раз переворачивают для экстракции фенола оставляют до разделения слоев. Дальнейший анализ удобно проводить на фарфоровой пластинке для капельного анализа. В лунку пластинки помещают 0,2 мл боратного буфера, затем 0,1 мл эфирного экстракта и 0,05 мл или 2 капли реактива Джибса. Смесь в пределах 3 мин окрашивается в синий цвет интенсивность окраски пропорциональна содержанию свободного и связанного фенола в моче. Интенсивность оценивают по пятибалльной системе (—, , +, ++, + + +). Иногда появляющееся преходящее пурпурное окрашивание смеси в расчет принимать не следует. Оно исчезает к моменту посинения. [c.40] В качестве стандартов для сравнения нельзя использовать водные растворы фенола, ибо они дают окраску, несколько отличающуюся от окраски образцов мочи. В оригинальной работе приведена цветная вкладка, которую вполне можно использовать в качестве стандарта. [c.40] Авторы метода указывают на необходимость проведения исследований только со свежей мочой (без признаков гниения) и отмечают, что тест дает адекватные результаты, будучи использован не позже чем через 24 ч после экспозиции бензолом. [c.40] Описание аппаратуры. А. Установка для экстракции (рис. 6). [c.41] Установка для окисления гидрохинона и отгонки хинона с водяным паром (рис. 7). [c.41] Парообразователь соединен с реакционной колбой, верхняя сферообразная часть которой, соединенная с нижней посредством шлифа, имеет воронку с краном для вливания окисляющего реактива и трубку на шлифе, соединенную с вертикальным холодильником. [c.42] Реактивы. 1. Серная кислота концентрированная и химически чистая. [c.42] Построение градуировочных графиков. А. Пирокатехин. 40 мг пирокахетина растворяют в 100 мл воды и стабилизируют каплей уксусной кислоты. Пользуются только свежеприготовленным раствором. Из этого основного раствора, имеющего концентрацию 400 мкг1мл, готовят рабочий раствор с концентрацией 20 мкг мл. В мерные 25 мл колбы вносят 1, 2, 3 и т. д. миллилитров этого раствора, добавляют в каждую колбу 0,25 мл уксусной кислоты и 0,5 мл раствора азотистокислого натрия. К тщательно перемешанному содержимому колб через 3—5 мин добавляют по каплям раствор щелочи до появления цветного оттенка, затем вносят еще 0,5 мл щелочи и доводят водой до метки. Одновременно при тех же условиях проводят холостой опыт, но без азотистокислого натрия. Фотометрируют с зеленым фильтром и по полученным результатам строят градуировочный график. В области до 150 мкг пирокатехина в 25 мл график имеет вид прямой линии. [c.42] Ход анализа. В коническую колбу помещают 40 мл фильтрата исследуемой мочи. Подкисляют десятью каплями серной кислоты и помещают на 2 ч на кипящую водяную баню. Моча частично испаряется, через полчаса темнеет, а фенолы, связанные с серной и глюкуроновой кислотами, отщепляются. Для полного извлечения фенолов при последующей экстракции образец должен быть нейтрализован. С этой целью охлажденный гидролизат обрабатывают избытком углекислого кальция, что предотвращает возможный сдвиг pH в щелочную сторону. Последнее нежелательно, поскольку в щелочной среде произойдет окисление и некоторые потери дифенолов. Нейтрализованный раствор фильтруют, осадок промывают небольщим количеством воды. [c.43] Экстракцию проводят в описанной установке для экстракции. Колбу с удлиненным горлышком наполняют фильтратом таким образом, чтобы он не доходил на 5 см до боковой трубки сверху помещают сложенную фильтровальную бумагу. В другую колбу наливают 2,5 мл уксусной кислоты, которая является консервантом экстрагированных фенолов, а затем через воронку эфир в таком количестве, чтобы он заполнил пространство над гидролизатом и сферическую часть колбы. Эту колбу помещают в водяную баню, нагретую до 60°, и производят экстракцию в течение 4 ч. Затем колбу с эфиром отсоединяют и эфир выпаривают при постепенном повышении температуры бани до 100°. Уксуснокислый остаток количественно переносят в мерную пробирку и доводят водой точно до 10 мл. В дальнейшем из этого раствора отбирают порции для анализа на тот или иной дифенол. [c.43] Определение пирокатехина. В мерную (25 мл) колбу вносят 1 мл исследуемого и подготовленного, как описано выше, образца и 0,5 мл раствора азотистокислого натрия. После основательного перемешивания начинают по каплям добавлять раствор щелочи вплоть до появления красной окраски, затем добавляют еще 0,5 мл щелочи. Всего расходуется в среднем 5 мл щелочи. Доводят раствор в колбе до метки водой. Одновременно тем же способом производят холостое определение, но без добавления азотистокислого натрия. Опытный образец фотометрируют с зеленым фильтром относительно холостого. Содержание пирокатехина в этом образце определяют из градуировочного графика и далее расчетным путем находят его количество в анализируемой моче. [c.43] Точность определения составляет 15%. [c.44] Определение гидрохинона. 5 мл подготовленного образца помещают в реакционную колбу установки для окисления и отгонки. Подкисляют 10 каплями серной кислоты и перегоняют с водяным паром. Собирают 75 мл дистиллята. Этот дистиллят содержит больщую часть уксусной кислоты, которая может помешать дальнейшему определению. [c.44] К остатку в реакционной колбе, содержащему нелетучий гидрохинон, добавляют 15 мл раствора сульфата церия и перегоняют с водяным паром 35 мл дистиллята в цилиндр, содержащий 5 мл буферного электролита. Доводят водой до 50 мл. После продувания азотом полярографируют. По градуировочному графику находят содержание гидрохинона в 5 жл подготовленного образца, а затем расчетным путем определяют его количество в моче. [c.44] Точность определения составляет 20%. [c.44] В нормальной моче людей гидрохинон, как правило, отсутствует. [c.44] Вернуться к основной статье