ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Специфические методы из "Белки Том 1" Часто для определения одного или нескольких компонентов белковой смеси оказываются пригодными специфические (химические или биологические) методы. Они могут применяться как для контроля степени фракционирования (совместно с менее специфическим методом определения общего содержания белка), так и для обнаружения гетерогенности белка. [c.21] Степень очистки данного компонента выражают отношением содержания этого компонента к общему содержанию белка (или к общему весу исходного вещества). Так как свойства чистого компонента редко известны заранее, то указанное отношение обычно выражают в произвольных единицах (например, в единицах на миллиграмм белка) и очистку продолжают до тех пор, пока не прекратится дальнейшее возрастание этой величины. В случае необходимости постоянство указанного отношения принимают в качестве критерия степени чистоты, однако компоненты смеси целесообразно подвергать возможно большему числу контрольных испытаний. С помощью специфических реакций на каждое из предполагаемых в качестве примесей веществ можно показать, в какой степени данный препарат освобожден от этих примесей чем больше сделано таких проб, тем больше вероятность того, что препарат является действительно чистым. [c.21] Эти методы могут применяться для открытия небелковых веществ и определения их количеств независимо от того, связаны ли они химически с белком, или нет. Обнаружение небелковых компонентов, которые, повидимому, вряд ли являются обязательной составной частью выделяемого белка, указывает на необходимость дальнейшей очистки. Однако при работе с неизвестным белком и даже в случае определенных белков, происхождение которых неизвестно, такое предположение следует делать осмотрительно. Сходные белки, выделенные из различных источников, даже если они обладают одной и той же биологической функцией, часто обнаруживают различия в составе. Например, дегидраза глицероальдегидфосфата, полученная кристаллизацией из мышцы кролика, обычно содержит прочно связанный кофермент — дифосфопиридиннуклеотид, — в то время как аналогичный фермент, полученный из дрожжей, его не содержит [103, 104]. [c.22] Аминокислотный состав этих двух белков также различен [105]. Один из альбуминов, выделенных кристаллизацией из плазмы лошади, имеет в своем составе углевод [30, 31], тогда как другой альбумин, полученный из того же источника [106], и альбумины плазмы человека и быка углевода не содержат [33]. Зангер недавно сообщил, что в инсулине свиньи содержится треонин, хотя в образцах инсулина, полученных из нескольких других источников, он отсутствует [107]. [c.22] Эти методы часто -являются наиболее..специфическими и тонкими методами обнаружения и количественного определения индивидуальных белков и некоторых других компонентов в смеси. В последующих томах настоящего сборника, а также в большом числе монографий [4, 43, 112, 113] описаны методы, пригодные для измерения активности таких белков, как ферменты, гормоны, токсины, антитела и т. п. [c.23] Хотя у некоторых типов белков до настоящего времени не обнаружено специфической биологической активности, подобной активности ферментов или гормонов, большинство белков при инъекции их соответствующим животным вызывает образование антител. Затем эти антитела, в некоторых случаях после надлежащей очистки, можно Использовать для доказательства наличия соответствующих антигенов. [c.23] При контроле перекрестных реакций и неспецифической преципитации необходимо принимать меры предосторожности, в связи с чем желательно применять количественные методы [43]. [c.23] Если биологическая активность белка служит критерием степени его очистки, то всегда желательно определять активность каждой из фракций. Регенерация полной исходной активности может считаться признаком того, что в ходе производившихся операций активный белок не претерпел никаких изменений. С другой стороны, отсутствие восстановления исходной активности может указывать на разрушение белка или на потерю существенно важного для реакции компонента, например кофермента. Кроме того, полезно сравнивать в каждой фракции различного типа активности, так как иногда случается, что в одной фракции достигается лучшая степень очистки, а в другой — больший выход. Если потери выделяемого вещества допустимы, то более желательной может быть первая фракция. [c.23] Вернуться к основной статье