ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Хроматографические и близкие к ним методы из "Химия белка" Соотношение количеств данной пары ионов в ионите н в растворе зависит от многих слолсных факторов, сопутствующих истинной адсорбции, а также и от заряда. Так, Уайтхорн [209] нашел, что основание более слабое, чем Кос = 1 X 10 , не адсорбируется из нейтрального раствора на пермутите. Эта зависимость от величины и знака заряда объясняет то резкое разделение, которое можно осуществить между дикарбоновыми, основными и нейтральными аминокислотами (надо напомнить, однако, что важен именно заряд, а не число потенциально ионизируемых групп). [c.65] Определение начала или конца вымывания моноаминокислот или лизина производилось 5 каплями экстракта, 0,5 мл 1%-ного раствора нингидрина и 0,5 мл (М/З pH = 7) фосфатного буфера. [c.66] Синтетические смолы применяются также для разделения основных аминокислот по Блоку и др. [211—212]. Виланд [213] показал, что основная АЬОз-колонка (т. е. АЬОз, содержащий ионы Na) будет задерживать аргинин и лизин, тогда как гистидин и моноаминокислоты вымываются нейтральным раствором. Виланд [212с] применял также синтетическую смолу вофатит-С. В своей кислой форме она удерживает гистидин, лизин и аргинин, а в виде калиевой соли — только лизин и аргинин. Колонка с вофатитом может удерживать в 20 раз больше, чем основная АЬОз-колонка такого же веса. [c.67] Подходящие синтетические смолы были такл е использованы для разделения дикарбоновых кислот. [c.68] Повидимому, хроматографическая методика, применяющая смолу не в виде свободного основания, а в виде соли, например ацетата, более удобна и требует меньше смолы и меньших объемов растворов, по крайней мере в тех случаях, когда основания не удаляются предварительно из гидролизатов. [c.69] Разделение моноамино-монокарбоновых кислот. Виланд [215] показал, что активированный кислотой АЬОз адсорбирует натриевые соли всех аминокислот из 80—90%-ного спиртового раствора аминокислоты несут при этих условиях отрицательный заряд, тогда как глюкоза при этом не удерживается. Он объяснял эту адсорбцию более кислым характером аминокислот в спирте. В действительности, однако, аминокислоты имеют менее кислый характер в спирте, чем в воде. Повидимому, высокая концентрация спирта препятствует обращению заряда на АЬОз, что приводит к повышению pH. Кислоты затем вымываются водой. [c.69] Рихтер и Кухар [223] применили колонку с активированной уксусной кислотой АЬОз для отделения цистина от аланина, валина, лейцина и пролина. Для проявления применялась 50%-пая смесь воды и спирта. Остаток цистина на колонке вымывался затем 0,05 н. ЫаОН-Юг АЬОз достаточно для Ъ мг цистина. Для проявления достаточ[ю 200 мл, для вымывания — 25 мл. [c.70] Истинная адсорбция. Вахтель и Кассиди [224—225] применяли активированный уголь для разделения глицина, лейцина, фенилаланина и тирозина с прекрасными выходами, за исключением тирозина и фенилаланина. [c.70] Шрамм и Примозиг [222] в статье, указанной выше, также изучали разделение различных моноамино-моно-карбоновых кислот. Для того чтобы получить количественное выделение адсорбированных кислот, они нашли необходимым сперва отравить уголь КСЫ, а затем изменять его адсорбционные свойства обработкой 5%-ной уксусной кислотой кислоты не вымываются 5%-ной уксусной кислотой, если не проведена эта предварительная обработка. Эту необратимость трудно понять, и мы надеемся, что появится теория, способная изменить современный эмпирический подход к проблеме изменения адсорбционных свойств. На угле, обработанном таким образом, удерживаются ароматические аминокислоты — фенилаланин, тирозин, триптофан, а все остальные вымываются 5%-ной уксусной кислотой (2 г угля удерживают 15 мг ароматических аминокислот 50 мл применялись для проявления, 100 мл 5%-ного фенола в 20%-ной уксусной кислоте необходимы для вымывания ароматических аминокислот). [c.71] Рихтер и Кухар [223] в статье, указанной выше, применяли активированный уголь для отделения тирозина и фенилаланина от алифатических аминокислот (0,5 г угля, обработанного КСН, на 5 мг каждой аминокислоты). Колонки проявлялись с 100 мл воды, а ароматические кислоты вымывались смесью пиридина с уксусной кислотой. Валин и лейцин также отделялись на колонке с 4 г угля, применяя 5 мг каждой аминокислоты (валин вымывался 300 мл М/15 фосфатного буфера при pH 5,6). Валин и метионин разделялись аналогично на колонке с 6 г угля (метионин вымывался 400 мл воды, валин — смесью пиридина, уксусной кислоты и воды 10 0,5 100). Выход в последних двух случаях разделения колебался около 93—98% более низкое значение, чем при других разделениях, возможно объясняется отсутствием предварительной обработки угля уксусной кислотой [223а]. [c.71] Турба с сотрудниками дали следующую схему анализа смесей аминокислот, основанную на различных хроматографических разделениях (см. стр, 73). [c.72] Они считают необходимым для предотвращения осаждения и окисления цистина действовать НгЗ. [c.72] Каррер, Келлер и Сцони [226] применили совершенно другой подход к разделению алифатических аминокислот. Метиловые эфиры Л/ - -фенилазобензоил производных проявлялись на колонке основного карбоната цинка с помощью смеси 5 95 бензола с петролейным эфиром. Образуются окращенные полосы производных глицина, аланина, лейцина и валина с глицином наверху. Аномальному положению валина пока не найдено объяснения. Метод в настоящее время еще не является количественным. [c.72] Вернуться к основной статье