ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Методы осаждения, работы Бергмана и сотрудников из "Химия белка" Методами осаждения были получены наиболее точные и общепринятые данные для аминокислотного состава белков. Некоторые из этих данных установлены с точностью до 2%. Такого рода результаты были поручены глав]1ым образом для основных и дикарбоновых аминокислот. Для достижения этого, однако, требуется большое искусство и опыт, а также большое количество затраченных человеко-часов. [c.86] Применяя метод осаждения, Чибнел с сотрудниками [315] разработали систему, основное положение которой состоит в том, что ни один реактив не вводится в гидролизат, если он не может быть затем количественно удален на дальнейших стадиях работы без самой небольшой потери азота, так как в (развернутой схеме анализа потери суммируются и могут достигнуть нескольких процентов общего азота белка. Поэтому некоторые реактивы или вообще не могут быть применены, или могут использоваться только на стадии, где есть основание отступить от этого положения . [c.86] Строгое осуществление рекомендуемого выше правила привело бы к отказу от некоторых общепринятых методов. Тем не менее его следует постоянно иметь в виду, особенно при расчете порядка аналитических операций. [c.86] Не имея собственного опыта в этих методах, мы не будем вда ваться в крдаику обширных литературных данных по анализу отдельных белков. [c.86] Осаждение свободных аминокислот и т. п. Прямое осаждение аминокислот из нейтрализованных гидролизатов (с прибавлением или без прибавления других солей) не является, вообще, распространенным количественным аналитическим методохм. Часть тирозина была определена в фиброине шелка Бергманом и Нима-ном [316], но о чистоте полученного продукта выражались сомнения [315, 317, 318]. Фокс [319] нашел, что продажный (осажденный) лейцин трудно освободить от метионина прямой перекристаллизацией, и рекомендовал перекристаллизацию из формильиых производных. Баптист и Робсон [320] применяли высаливание для приготовления смешанных моноаминокислот [321—322]. [c.87] Глютаминовая кислота обычно изолируется в последней стадии осаждением ее гидрохлорида в присутствии избытка НС1. Были сделаны попытки изучения относительной растворимости различных оптических форм. [c.87] Фосфорно-вольфрамовая кислота. Этот осадитель широко использовался в растворе сильной кислоты для осаждения основных аминокислот (аргинина, гистидина и лизина) и аминов аммиак, однако, пе выделяется, если разложить фосфорновольфрамовые соединения эфиром и амиловым спиртом при кислом pH [323]. Разложение растворителями лучше, чем применение барита, так как оно сопровождается лишь очень малой потерей азота [315]. [c.87] Орнитин, повидимому, трудно полностью осадить фосфорновольфрамовой кислотой [326—327]. Было бы интересно знать его поведение в присутствии других осно1в-ных аминокислот. [c.88] Фосфорновольфрамовое соединение пролина нерастворимо и применялось для очистки пролина [328]. [c.88] В виде бариевой соли или экстрагировали его -бутиловым спиртом из кислого раствора. [c.89] Тот факт, что при этом процессе могут осаждаться другие аминокислоты, указывает, что количественный анализ обработанных таким путем гидролизатов должен интароретироваться с осторожностью. Тем не м нее была разработана достаточно пригодная аналитическая методика, особенно для определения глютаминовой и аспарагиновой кислот. Какое значение имеет наличие примесей в осадке для количественного определения цистина и метионина, остается неясным, так как при проведении опыта по Лукачу — Бевериджу имеется двухвалентная медь, которая может быть причиной загрязнений. [c.93] Соединения серебра, ртути и кадмия. Осаждение соединениями серебра применялось уже в ранних работах, которые привели к открытию основных аминокислот [380]. Это применение серебра составило важную часть системы анализа оснований, которая была разработана детально и со многими модификациями [315, 333, 335, 336, 352, 381—394]. В этой связи основное значение имеют работы Викери и сотрудников, которые установили очень точные данные по аргинину, гистидину и лизину для ряда белков. [c.93] Гистидин и аргинин были отделены от лизина и др. осаждением серебром при щелочном pH (см. однако [395]), а гистидин отделен от аргинина при нейтральной реакции. Осаждение гистидина проводилось до и после щелочного осаждения. Осаждение проводилось прямо из белковых гидролизатов, а также из белковых гидролизатов, частично или полностью освобожденных от цистеина, из основной фракции, полученной осаждением фосфорновольфрамовой кислотой, и т. п. Аргинин обычно определялся после удаления серебра весовым методом в виде монофлавианата. [c.93] Лизин обычно выделяется из маточного раствора осаждением серебром, с последующим осаждением фосфорновольфрамовой или пикриновой кислотой. [c.94] Метод в этой форме был подвергнут критике со стороны Тристрама [394], и также Чибнела, Риса и Вильямса [315]. [c.94] Вернуться к основной статье