ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Микробиологические методы анализа аминокислот. (Перевод Г. А. Деборина) из "Химия белка" Основной обменный тип адсорбции, хорошо известный на пермутитах и аналогичных веществах, применяющихся для опреснения воды, играет все возрастающую роль при разделении аминокислсп, пептидов и других органических веществ. Известны катионные и анионные обменные адсорбенты, причем их число быстро увеличивается с появлением синтетических обменных смол, характерные свойства которых можно изменять по желанию [22, 23, 24]. Естественно, что прежде всего былч испытаны в этой работе вещества с более или менее ясно выраженным электрохимическим характером, в данном случае диаминомонокарбоновые кислоты, моно-аминодикарбоновые кислоты и пептиды с остатками этих кислот. Однако при прибавлении других веществ (см. ниже) можно изменять электрохимические свойства и нейтральных аминокислот, так что некоторые из них также могут проявлять отчетливые адсорбционные свойства на обменных адсорбентах, Следует также напомнить, что трудно отделить один тип адсорбции от другого и что очень часто молекулярная адсорбция играет также роль и в случае типичных обменных адсорбентов. Относительная легкость, с которой можно влиять на адсорбцию изменением ионной среды, особенно в отношении концентрации водородных ионов, является, однако, характерной и имеет большое практическое значение в методах разделения и вымывания. [c.162] Другой характерной особенностью этого типа адсорбции является заметная зависимость от концентрации электролита, особенно выраженная для адсорбентов типа окиси алюминия. Это усложняет положение, так как затрудняет применение буферных растворов, которые могли бы удерживать определенное pH в процессе разделения. Пока еще не было произведено систематического, подробного исследования по адсорбции амфо-литов на обменных адсорбентах при достаточно различных условиях (в частности при изменении pH электролита), но было получено большое количество эмпирических данных в связи с попытками применить эти адсорбенты для разделения аминокислот [10, 12]. [c.163] По аналогии, анионные обменные адсорбенты типа амберлита IR-4 должны связывать преимущественно дикарбоновые кислоты. Это действительно имеет место. Смесь аминокислот и соляной кислоты, которая перемешивалась 1—3 часа с достаточным количеством смолы до получения конечного pH 6—7, полностью адсорбирует кислые аминокислоты, оставляя без изменения нейтральные и основные аминокислоты. В чистой фракции, вымытой со смолы соляной кислотой, Кеннан [4] определил отдельно аспарагиновую и глю.таминовую кислоты, комбинируя метод электрометрического титрования в водных и формальдегидных растворах с газометрическим нингидриновым определением. [c.165] ДЛЯ разделения исключительно адсорбционные методы. Некоторые предварительные опыты в лаборатории автора показали, что можно разделить аргинин и лизи 1 в описанном интерферометрическом приборе это же, вероятно, справедливо для смесей аспарагиновой и глютаминовой кислот. [c.166] Таким образом, в этой области открывается большое число возможных методов проведения адсорбционного анализа. К ним надо добавить важные методы распределительной хроматографии по Мартину и Синджу. Пока еще невозможно рекомендовать наилучшие методы работы, так как различные методы еще не испытаны при достаточно разнообразных условиях. Следует напомнить, что если даже непосредственной целью является точный и удобный полумикроанализ белковых гидроли-затов, то эти методы должны также оцениваться с точки зрения их возможностей для разделения и анализа пептидов, что имеет первостепенное значение для наших знаний о тонкой структуре белков. [c.167] Поэтому еще слишком рано указывать на подходящую комбинацию методов для определенной схемы анализа белковых гидролизатов [29, 41, 50]. Шрамм и Примозиг подчеркивают значение применения возможно меньших количеств адсорбента для устранения больших объемов промывающих растворов, а также необходимость устранения накопления солей, которые могут серьезно препятствовать применению некоторых адсорбентов (силикагель, окись алюминия). Незакономерное поведение цистина также представляет трудности. Эта аминокислота легко окисляется до соответствующей сульфоновой кислоты, которая проявляет иные адсорбционные свойства. Во избежание этого Шрамм рекомендует проводить адсорбцию в присутствии Н25. [c.167] Микроорганизмы уже давно (i901 г.), применяются для уста1Новле ия присутствия веществ, которые повышают скорость или степень их роста, и используются для контроля очистки и изолирования этих веществ [105]. Вильямс [106] наблюдал большое сходство в свойствах биотических веществ и водорастворимых витаминов , потребляемых животными, и предлол ил применение дрожжей для их определения. Последующее развитие вопросов питания животных и дрожжей показало сложную природу как биотических веществ, так и витаминов. Применение микроорганизмов для количественного определения отдельных компонентов питательных веществ способствовало выяснению их потребностей в питании. При этом была установлена удивительная аналогия между потребностями в питании микроорганизмов и экспери.мен-тальных животных [67, 107]. [c.170] Вследствие этого сходства стало возможным применять микроорганизмы для количественного определения многих веществ, являющихся существенными компонентами жнвых тканей. Такие количественные методы называются методами микробиологического анализа . [c.170] Одним из первых методов микробиологического анализа, проявляющим заметную специфичность, был метод, предложенный Шопфером [78] для витамина Bi, с применением плесени Phy omy es blakesleeanus. Несмотря на продолжающееся изучение и ряд модификаций, метод не нашел широкого применения [II, 31, 54]. [c.170] Вернуться к основной статье