ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Фракционирование, основанное на различиях в электрофоретической подвижности из "Химия белка" До сих пор мы рассматривали типы приборов, к которым приложим принцип Вильямса и Уотермана. Этот метод дает хорошие результаты в двух случаях 1) если изоэлектрические точки сильно различаются между собой в этом случае метод оказывается эффективным даже при плоском ходе кривых pH — подвижность и в присутствии солей (три группы аминокислот) 2) если изоэлектрические точки близки, но кривые pH — подвижность крутые и соли практически отсутствуют (белки, растворенные в дестиллированной воде). [c.262] В присутствии даже малых количеств электролитов метод Вильямса и Уотермана не очень пригоден. Иа электродах собираются больщие количества кислоты и щелочи, которые растекаются по камерам. Градиент pH не будет уже столь плавным, как в упомянутых выше опытах Спайса, и практически все изменение pH лока-ли,зуется между двумя соседними камерами. Так как крайние значения связаны с высокой проводимостью, то и градиент потенциала будет локализован в одной точке, а в других частях прибора водородные и гидроксильные ионы и соответствующие им ионы будут переносить большую часть тока и разделение будет очень плохим. [c.262] Эти трудности, которые играют значительную роль в тех случаях, когда электролиты не могут быть полностью удалены, были рассмотрены Ганом и Тизелиу-сом[50]. В таких белковых системах необходимо работать, применяя буферные растворы, и использовать различия в подвижности, а не различия в изоэлектрической то 1ке. Согласно этому принципу методы фракционирования могут быть далее подразделены на методы, в которых конвекционные токи у мембран не имеют существенного значения, и методы, в которых разделение является результатом такой конвекции. [c.263] Углеводы также фракционировались при помощи электрофореза. Пионером в этой области является Са-мек, но он применял метод электрорасслоения, которьп будет упомянут в этом обзоре позже. Здесь будут рассмотрены некоторые другие простые приборы для фракционирования крахмала. [c.267] Электрофоретическое разделение крахмала производилось также Далем [30], который применял вертикальное электрическое поле. Даль[28,29] сконструировал деревянный прибор с электродами из нержавеющен стали, изображенный на рис. 31. [c.267] Явление расслоения (Бланк и Валько [1928]). [c.268] Прибор Гутфрейнда показан на рис. 36. После предварительных опытов с яичным альбумином при pH 7 и с гемоглобином при pH 5, в которых наблюдалось явление расслоения, Гутфрейнд исследовал разделение смеси этих двух белков при pH 6,8 (изоэлектрическая точка гемоглобина). Через 6 часов содержимое центрального отделения было разделено на 12 фракций, которые анализировались на яичный альбумин и гемоглобин. Было найдено, что четыре верхние фракции не содержали яичного альбумина, а в нижних фракциях его концентрация росла от 0,2 до 2,5% (начальная концентрация 0,9 %). [c.273] Кирквуд [57] предложил метод разделения белков, основанный на наложении дифе-ренциального горизонтального переноса при электрофорезе на вертикальный конвекционный перенос, вызываемый горизонтальным градиентом температуры. При экспериментальном испытании метода, однако, было найдено, что градиент плотности, вызываемый соответствующей разностью температуры, был меньше, чем градиент, белков, мигрирующих к мембране. [c.273] ОпытЬ по разделению со смесью гемоглобина и серумальбумина или азоовальбумина дали факторы разделения, лежащие между 1,27 и 2,37 (фактор, равный 1,00, означает отсутствие разделения). [c.274] Вернуться к основной статье