ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Методы разделения смесей аминокислот из "Химия биологически активных природных соединений" Для разделения и количественного определения аминокислот, содержащихся в белковом гидролизате, ирименяются следующие методы ионообменная хроматография, бумажная хроматография и электрофорез, газожидкостная хроматография. [c.67] Сущность метода состоит в том, что белковый 1идролизат помещают на колонку с ионообменником, которая непрерывно промывается буфером с возрастающим pH (градиентная элюция). Элюат, вытекающий из колонки, встречается с капиллярным током нингидринового реактива и поступает затем в змеевик, где под влиянием повышенной температуры развивается голубое окрашивание (в случае пролина и оксипролина — желтое). Затем элюат попадает в кюветы, где измеряется его оптическая плотность при 570 и 440 ммк. Результаты фотометрирования автоматически записываются в виде серии максимумов. Полный анализ гидролизата продолжается 24 ч. Количественное определение аминокислот в гидролизате проводят, измеряя площадь пиков, отвечающих отдельным аминокислотам. [c.68] На примере рибонуклеазы показано, что автоматический анализатор аминокислот позволяет точно и быстро определять аминокислотный состав белков (см. рис. 11). [c.68] Основные аминокислоты (гистидин, лизин, аргинин) и аммиак, выделяющийся при гидролизе остатков аспарагина и глутамина, определяют на отдельной колонке, поэтому для них приведен отдельный график (справа). Аспарагин и глутамин нри этом превраш аются в аспарагиновую и глутаминовую кислоты. Обычно проводят ряд параллельных анализов при разных концентрациях исходного гидролизата (пунктирные пики). [c.68] Дальнейшее развитие и совершенствование метода ионообменной хроматографии для аминокислотного анализа белков идет по пути уменьшения количества гидролизата, необходимого для анализа и упрош е-ния аппаратуры. [c.69] В двух различных системах растворителей можно добиться полного разделения всех аминокислот белковых гидролизатов (рис. 12). Для количественного определения аминокислот удобнее одномерные хроматограммы . [c.70] Количественная оценка состава гидролизата по хроматограмме может быть проведена колориметрически или при помощи денситометра (путем сравнения плотности окраски и площади пятен для исследуемой смеси и стандарта), а также другими специальными способами. Иногда аминокислоты переводят в медные комплексы или динитрофенильные производные и хроматографируют их в виде таких производных. [c.70] Для разделения аминокислот и их производных используется также тонкослойная хроматография носителем служит силикагель О. По сравнению с бумажной хроматографией этот метод гораздо быстрее и проще, но менее эффективен. [c.70] Газо-жидкостная хроматография. Из хроматографических методов следует также упомянуть газо-жидкостную хроматографию. В основе данного метода лежит распределение между двумя фазами, одна из которых газообразна. В связи с этим аминокислоты предварительно переводят в летучие производные, такие, как альдегиды амины эфиры карбоновых кислот эфиры ацетил- или трифтор ацетил аминокислот Применение газо-жидкостной хроматографии очень перспективно, так как время, требуемое для проведения анализа, в этом случае минимально (0,5-1 ч). [c.71] Результаты аминокислотного анализа белка приводят обычно в виде таблицы, где содержание аминокислот указывается в процентах или выражается числом остатков данной аминокислоты в молекуле (табл. 5). [c.72] Вернуться к основной статье