ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Определение концевых остатков аминокислот из "Химия биологически активных природных соединений" Кроме а-аминогрупп с динитрофторбензолом реагируют также е-ами-ногруппы лизина, ЗН-группы цистеина, ОН-группы серина и треонина и имидазольный цикл гистидина. Производные серина, треонина и гистидина не окрашены и не вносят затруднений при использовании метода. [c.72] Динитрофенильные производные аминокислот разрушаются на свету, поэтому все операции с ними проводят в темноте. [c.72] ДНС-производные флуоресцируют в УФ-свете, что используется для их обнаружения. Поэтому чувствительность метода очень высока (до 10 моль). [c.73] Фенилтиогидантоины сравнительно устойчивы к кислотам они могут быть выделены из гидролизата и идентифицированы по температурам плавления или хроматографически В некоторых случаях аминокислоты удобнее идентифицировать, если они получены разложением соответствующих фенплтиогидантоинов гидроокисью бария. [c.74] Оставшийся пептид можно еще раз обработать фенилизотиоцианатом, отщепить и идентифицировать вторую аминокислоту, затем третью и т. д. Поэтому метод иногда называют ступенчатая деградация по Эдману . [c.74] Циклизация в присутствии кислот обычно вызывает частичный гидролиз неконцевых пептидных связей. Однако в большинстве случаев удается определить последовательно до 13 остатков с К-конца, а иногда и более. [c.74] Большим достижением является создание автоматического прибора для анализа этим методом N-концевых последовательностей в белках, который получил название секвенатор (от английского слова sequen e — последовательность) Прибор, сконструированный Эдманом, позволяет работать с 0,25 мкмоль белка и определять несколько десятков аминокислот с N-конца молекулы. [c.75] Недостатком карбоксипеитидазного метода является необходимость использования очень чистых препаратов фермента, так как даже незначительные примеси протеиназ других типов ведут к неверным результатам. [c.75] В случае а-лактальбумина использование карбоксипептидазы А позволило определить шестичленную С-концевую последовательность . [c.75] Для определения С-концевых аминокислот используют также восстановление белка гидридами металлов и обработку изотиоцианатом аммония, в результате которой из С-концевой аминокислоты образуется тио-гидантоин Однако оба метода не свободны от существенных недостатков (побочные реакции, неясный механизм), а потому полученные с их помощью данные нуждаются в дополнительной проверке. [c.76] Вернуться к основной статье