ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Разрушение дисульфидных связей из "Химия биологически активных природных соединений" Дисульфидные связи в нативных белках в условиях гидролиза легко подвергаются перегруппировкам и осложняют определение аминокислотной последовательности поэтому их предварительно разрушают и переводят остатки цистеина в более устойчивые производные. [c.77] Существует три метода разрушения дисульфидных связей, ни один из которых не является полностью безупречным. [c.77] Если дисульфидная связь в белке соединяет две отдельные цепи, то после окисления молекулярный вес белка снижается, и полипептиды, соответствующие каждой цепи, как правило, можно выделить в индивидуальном виде (например, в случае инсулина ). Если же дисульфидная связь соединяет два участка одной и той же цепи, то после окисления молекулярный вес продукта не изменяется (рибонуклеаза, лизоцим). [c.77] Эта реакция, в частности, была использована при исследовании структуры инсулина и рибонуклеазы Остатки образующейся цистеиновой кислоты устойчивы, а наличие группы — 80дН придает пептидам кислые свойства, что может быть использовано при изучении аминокислотного состава и последовательности окисленных белков. [c.77] К недостаткам метода следует отнести окислительное расщепление остатков триптофана и метионина и возможность других побочных реакций вследствие чего реакция цистина с надмуравьиной кислотой никогда не протекает количественно. Выход цистеиновой кислоты обычно не превышает 90%. [c.77] Для количественного восстановления рибонуклеазы и других белков оказалось необходимым проводить реакцию в концентрированных растворах мочевины. Однако если последующий диализ для удаления мочевины провести нельзя, это может явиться большим недостатком. [c.78] В присутствии окислителя (например, Си , кислород) соединение II вновь превращается в дисульфид, который разрушается сульфитом и целиком переходит в З-сульфонат I. Для полного расщепления всех дисульфидных связей предложено вести процесс с добавлением каталитических количеств цистеина или р-меркаптоэтиламина. [c.78] Вернуться к основной статье