ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Ступенчатый синтез пептидов на полимерном носителе из "Твердофазный синтез пептидов" На рис. 18 показан прибор, применяемый при синтезе пептидов ручным методом. (Подробное описание реакционных сосудов и механической качалки см. на стр. 147—152.) Размер реакционного сосуда определяется количеством полимера, которое предстоит использовать в синтезе. Большой сосуд предназначен для 5—10 г полимера, средний — для 1,5—4,5 г полимера, маленький — от 1 г и меньше. Полимер с присоединенной к нему С-концевой БОК-аминокислотой загружают в реакционный сосуд и препарат оставляют набухать в диоксане в течение нескольких минут до начала ряда последовательных стадий, проводимых при синтезе данного пептида. Введение в реакционный сосуд растворителей и реактивов осуществляют через боковой отвод, а их удаление — путем отсасывания через пористый стеклянный фильтр на дне реакционного сосуда. Сосуд соединяется с атмосферой через осушительную трубку в боковом отводе. Осушительную трубку наполняют хлористым кальцием, предварительно поместив в шарик трубки индикатор драйерит (см. приложение А). Осушительную трубку снимают с бокового отвода только в моменты введения или удаления растворителей. [c.82] Последовательность операций прибавления каждой аминокислоты к полимеру при использовании карбодиимида представлена в программе А (стр. 86,88—92). Более подробная информация содержится в работе Мэррифилда и Кориглиано [79] по синтезу тетрапептида. [c.82] Типичная таблица для синтеза пентапептида приведена ниже (табл. 1). Перед тем, как выполнять очередную операцию, таблицу проверяют и записывают время в соответствующую клетку. [c.83] Пептидил-полимер промывают СНаСООН и спиртом, затем сушат. Вес = 0,63 г. [c.85] В конце синтеза пептидил-полимер помещают на тарированную воронку с пористым фильтром, промывают уксусной кислотой, спиртом и сушат в вакуум-эксикаторе над едким кали. Так как часть аминокислот может быть связана с пептидил-полимером ионогенно или за счет адсорбции после стадии пептидообразования, то анализы пептидил-полимеров или неочищенных отщепленных пептидов на содержание аминокислот лучше проводить после дополнительной стадии удаления БОК-защитной группы. НС1 в диоксане (или НС1 в СНзСООН) удаляет сорбированную БОК-аминокислоту. Промывку пептидил-полимера следует проводить очень тщательно, чтобы удалить из вещества весь НС1 перед длительным хранением. Вес пептидил-полимера записывают. Увеличение веса полимерного носителя в процессе синтеза может служить приблизительным методом контроля количеств присоединенных аминокислот и дает верхний предел количества пептида, полученного на полимере. Аликвотную часть пептидил-полимера можно проанализировать на аминокислотный состав (см. стр. 122). После этого пептид отделяют от полимерного носителя одним из методов, рассмотренных на стр. 93—104. [c.88] При твердофазном пептидном синтезе скорость наращивания пептидной цепи обычно - достигает двух аминокислотных остатков в день. При более эффективной работе, с использованием карбодиимида, можно проводить этот процесс со скоростью присоединения трех аминокислотных остатков в день, особенно, если третью реакцию пептидообразования переносить на ночь, что всегда возможно. Для включения и выключения мотора через определенные промежутки времени можно использовать реле времени. [c.88] Вернуться к основной статье