ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Количественное определение аргинина по Сакагучи из "Твердофазный синтез пептидов" По реакции Сакагучи незамещенные или моноза-.мещенные гуанидины дают красную окраску раствора более высоко замещенные гуанидины в реакцию не вступают. Поэтому аргинин и пептиды аргинина дают положительную реакцию, в то время как защищенные аргинины (например, Ы -нитро- или Ы -тозиларгинин) и их пептиды этой цветной реакции не дают. По этой причине реакцию можно использовать после восстановления нитроаргинина, а также для обнаружения пептидов аргинина при ПТР и хроматографии. [c.129] Растворы. 1. Неизвестный образцы растворов пептидов или аликвотные пробы, взятые до и после гидрирования пептида, разбавляют смесью метанол — вода (1 9) до получения раствора, содержащего от 0,02 до 0,1 мкмоля аргинина на 1 мл. [c.129] Реактивы. I. 1мг а-нафтола растворяют в 1мл метанола, разбавляют водой в отношении 1 5, получая 0,02%-ный раствор а-нафтола в 20%-ном метаноле (пригоден в течение 2 мес). [c.129] И сразу добавляют 0,4 мл реактива 4. Смесь вновь перемешивают и измеряют поглощение при 515 нм (оптимальное поглощение наблюдается через 20 сек после добавления реактива 3). Хотя 5 мкг хлоргид-рата аргинина дают поглощение в 0,2 единицы, молярный коэффициент поглощения для аргинина, входящего в состав пептида, может быть значительно ниже, чем для свободного аргинина. Например, выход брадикинина, определенный по цветной реакции, составил лишь около 70% от ожидаемого, а для некоторых белков выход, определенный по цветной реакции, равнялся 20% от действительного количества. [c.130] Вернуться к основной статье